Күчөтүү сигналдары жок

1.Комплекттеги Taq ДНК Полимераза туура эмес сакталгандыктан же комплекттин мөөнөтү аяктагандыктан активдүүлүгүн жоготот.
Сунуш: комплекттин сактоо шарттарын ырастаңыз;Так ДНК Полимеразанын тиешелүү көлөмүн ПТР тутумуна кайра кошуңуз же тиешелүү эксперименттер үчүн жаңы Real Time ПТР комплектин сатып алыңыз.

2.There ДНК шаблон Taq ДНК Полимераза ингибиторлору көп.
Сунуш: Шаблонду кайра тазалаңыз же колдонулган шаблондун көлөмүн азайтыңыз.

3.The Mg2+ концентрациясы ылайыктуу эмес.
Сунуш: Биз берген 2× Реал ПТР Миксинин Mg2+ концентрациясы 3,5 мм.Бирок, кээ бир атайын праймерлер жана шаблондор үчүн Mg2+ концентрациясы жогору болушу мүмкүн.Ошондуктан, Mg2+ концентрациясын оптималдаштыруу үчүн MgCl2 түз кошсоңуз болот.Оптималдаштыруу үчүн ар бир жолу Mg2+ 0,5мМ көбөйтүү сунушталат.

4.ПЦР күчөтүү шарттары ылайыктуу эмес жана праймердин ырааттуулугу же концентрациясы туура эмес.
Сунуш: праймер ырааттуулугунун тууралыгын ырастаңыз жана праймер бузулган эмес;эгерде күчөтүү сигналы жакшы болбосо, күйгүзүү температурасын төмөндөтүп, праймердин концентрациясын тийиштүү түрдө тууралап көрүңүз.

5.Шаблондун көлөмү өтө аз же өтө көп.
Сунуш: Шаблонду линиаризациялоо градиенттин суюлтуусун аткарыңыз жана реалдуу убакыттагы ПТР эксперименти үчүн мыкты ПТР эффектиси менен калыптын концентрациясын тандаңыз.

NTC өтө жогору флуоресценттик мааниге ээ

1.Иш учурунда пайда болгон реагенттин булганышы.
Сунуш: Real Time ПТР эксперименттери үчүн жаңы реагенттер менен алмаштырыңыз.

2. Контаминация ПТР реакция системасын даярдоодо болгон.
Сунуш: Иштөө учурунда зарыл болгон коргоочу чараларды көрүңүз, мисалы: латекс колкаптарды кийүү, чыпкасы бар пипетка үчүн ж.б.

3.Праймерлер бузулуп, праймерлердин деградациясы спецификалык эмес күчөтүүнү пайда кылат.
Сунуш: праймерлердин бузулгандыгын аныктоо үчүн SDS-PAGE электрофорезин колдонуңуз жана аны реалдуу убакыттагы ПТР эксперименттери үчүн жаңы праймерлер менен алмаштырыңыз.

Primer dimer же спецификалык эмес күчөтүү

1.The Mg2+ концентрациясы ылайыктуу эмес.
Сунуш: Биз камсыз кылган 2× Real PCR EasyTM Mixтин Mg2+ концентрациясы 3,5 мм.Бирок, кээ бир атайын праймерлер жана шаблондор үчүн Mg2+ концентрациясы жогору болушу мүмкүн.Ошондуктан, Mg2+ концентрациясын оптималдаштыруу үчүн MgCl2 түз кошсоңуз болот.Оптималдаштыруу үчүн ар бир жолу Mg2+ 0,5мМ көбөйтүү сунушталат.

2.The PCR annealing температурасы өтө төмөн.
Сунуш: ПЦР күйгүзүү температурасын ар бир жолу 1℃ же 2℃ жогорулатыңыз.

3.ПЦР продукт өтө узун.
Сунуш: Реалдуу убакыттагы ПТР продуктунун узундугу 100-150 бит, 500 биттен ашпашы керек.

4.Праймерлер бузулуп, праймерлердин бузулушу конкреттүү күчөтүүнүн пайда болушуна алып келет.
Сунуш: праймерлердин бузулгандыгын аныктоо үчүн SDS-PAGE электрофорезин колдонуңуз жана аны реалдуу убакыттагы ПТР эксперименттери үчүн жаңы праймерлер менен алмаштырыңыз.

5.ПЦР системасы туура эмес, же система өтө кичинекей.
Сунуш: ПТР реакция системасы өтө кичинекей болсо, аныктоо тактыгынын төмөндөшүнө алып келет.Реалдуу убакыттагы ПТР экспериментин кайра иштетүү үчүн сандык ПТР аспабы сунуштаган реакция системасын колдонуу эң жакшы.

Сандык маанилердин начар кайталанышы

1. Аспап иштебей жатат.
Сунуш: Аспаптын ар бир ПТР тешигинин ортосунда каталар болушу мүмкүн, натыйжада температураны башкаруу же аныктоодо начар кайталанууга алып келет.Тиешелүү аспаптын көрсөтмөлөрүнө ылайык текшериңиз.

2.The үлгү тазалыгы жакшы эмес.
Сунуш: Таза эмес үлгүлөр калыптын жана праймерлердин тазалыгын камтыган эксперименттин начар кайталанышына алып келет.Шаблонду кайра тазалоо эң жакшы, ал эми праймерлер SDS-PAGE аркылуу эң жакшы тазаланат.

3.ПЦР системасын даярдоо жана сактоо убактысы өтө узун.
Сунуш: Даярдоодон кийин дароо ПТР эксперименти үчүн Real Time ПТР системасын колдонуңуз жана аны көпкө калтырбаңыз.

4.ПЦР күчөтүү шарттары ылайыктуу эмес жана праймердин ырааттуулугу же концентрациясы туура эмес.
Сунуш: праймер ырааттуулугунун тууралыгын ырастаңыз жана праймер бузулган эмес;эгерде күчөтүү сигналы жакшы болбосо, күйгүзүү температурасын төмөндөтүп, праймердин концентрациясын тийиштүү түрдө тууралап көрүңүз.

5.ПЦР системасы туура эмес, же система өтө кичинекей.
Сунуш: ПТР реакция системасы өтө кичинекей болсо, аныктоо тактыгынын төмөндөшүнө алып келет.Реалдуу убакыттагы ПТР экспериментин кайра иштетүү үчүн сандык ПТР аспабы сунуштаган реакция системасын колдонуу эң жакшы.