Киришүү:

РНК, илимий аталышы рибонуклеин кислотасы, анын аббревиатурасы RiboNucleic Acid деген сөздөн келип чыккан, фосфодиэстер байланыштары аркылуу жок дегенде ондогон рибонуклеотиддерди туташтыруудан пайда болгон нуклеиндик кислотанын бир түрү.

РНКны изилдөөнүн негизи булганбаган жалпы РНКны бөлүп алуу болуп саналат жана РНКны экстракциялоонун негизги принциби болжол менен төмөнкүчө чагылдырууга болот:

1. Адегенде клеткаларды бузуу

2. Андан кийин макромолекулярдык кирлерди (белоктор, липиддер, ДНК ж.б.) жок кылыңыз.

3. Акыр-аягы, РНК туздарды жана органикалык эриткичтерди алып салуу жана андан ары РНКны тазалоо, ал эми чөктүрүлөт.

Экстракция ыкмасынын мурунку жана азыркы учуру

РНКны экстракциялоо ыкмасынын биринчи мууну бул Пиотр Хомчински аттуу чоң ата жана Николетта Сакчи тарабынан ойлоп табылган TRIzol тундурма ыкмасы (колдонулган реагенттерге гуанидин-изотиоцианат, фенол, хлороформ ж.

Кийинчерээк чоң ата бул патентти Invitrogen компаниясына сатып, Invitrogen бул ыкманы дүйнөгө таанытып, кеңири колдонулган ыкмага айланган.

Кийинчерээк, Invitrogen Thermo тарабынан сатылып алынган!

Өкүл продукт: Invitrogen's TRIzol реагенти

Бирок, TRIzol тундурма ыкмасы РНКны бир нече жолу преципитациялоону жана экстракциялоону талап кылат жана колдонулган реагенттер уулуу жана иштеши үчүн көп убакытты талап кылат.

Ошондуктан, экинчи муундагы колонна-фермент тазалоо ыкмасы пайда болгон, ал башка аралашмаларды жок кылуу менен үлгүдөгү РНКны максималдуу калыбына келтирүү үчүн спецификалык нуклеин кислотасын адсорбциялоочу материал катары силикагель кабыкчасын колдонгон.

Экинчи муундагы ыкма туруктуу иштөөнүн негизинде операцияны жөнөкөйлөтөт, тобокелдик факторун азайтат жана РНКны экстракциялоонун натыйжалуулугун жогорулатат.

Өкүл продуктылар: QIAGEN RNeasy жана ата мекендик продукциялардын көбү

Бирок, биринчи жана экинчи муундагы ыкмалар ДНКнын булганышын жок кылуу үчүн ДНазаны колдонууну талап кылат, бул кийинки агымдагы эксперименттерге бир аз ыңгайсыздыктарды алып келет.Калдык DNase тескери транскрипциянын эффективдүүлүгүн төмөндөтөт жана биринчи катардагы cDNA синтезин азайтат, ошону менен натыйжалардын тактыгына таасирин тийгизет.

Ошондуктан, үчүнчү муун казып алуу ыкмасы экинчи муундун негизинде оптималдаштырылган.Экспериментке эч кандай фермент кошуунун кереги жок жана РНКны эки гана мамыча менен оңой алууга болот.

1-графа: ДНКны тазалоо үчүн ДНК-тазалоо тилкеси

2-графа: бир гана РНК тилкеси атайын адсорбцияланат жана РНКны калыбына келтирет

Мындай жөнөкөй операция убакытты үнөмдөө менен гана чектелбестен, теменку агымдагы эксперименттердин иштешин жеңилдетет!

Өкүл продуктылар: QIAGEN RNeasy Plus жанаForegeneРНК тазалоо сериясы продуктылары

(RNeasy Plus)

（Foregene'sӨсүмдүктүн жалпы РНК изоляциясынын комплекти）

Унчукпай айтам!Foregene'нин РНК комплекти ошондой эле колдонууга оңой болгон RNase Eraserти сунуштайт, ал адамдын денесине эч кандай уулуу заттарды кошпостон, катуу беттеги 400μг RNaseди 1 мүнөттүн ичинде толугу менен жок кыла алат!

Сүрөт1: Операциялык процессти салыштыруу диаграммасы

Foregene компаниясынын өнүмдөрү РНК экстракциясын эки эле ырда бүтүрө алат, башкаларды экспериментиңиздин жүрүшүнө кызганбаңыз!

Сүрөт2:Eэксперименталдык натыйжалар салыштыруу диаграммасы

Биринчи муун (1: TRIzol)

Экинчи муун (2: QIAGENдин RNeasy)

Үчүнчү муун (3: QIAGENдин RNeasy плюс, 4: Foregene)

Сүрөт3: qPCR графиги (күчөтүү ийри сызыгы)

Биринчи муун (жашыл TRIzol -, кызыл TRIzol + дегенди билдирет)

Экинчи муун (көк түс QIAGEN RNeasy-, кызыл QIAGEN RNeasy + дегенди билдирет)

Үчүнчү муун (көк QIAGEN RNeasy плюс дегенди билдирет, жашыл Foregene дегенди билдирет)

(Эскертүү: qPCR графиги “-” DNase кошулбаганын жана ДНКнын булгануусу жок кылынбаганын көрсөтөт. Демек, КТ жогорураак жана натыйжа так эмес; “+” ДНаза кошулганын жана ДНКнын булганышы жок кылынганын көрсөтөт, натыйжа так)

Ар бир техникалык жаңылоо эксперименттин иштөөсү жөнөкөй жана колдонуучуга ыңгайлуу багытта өнүгүп жатканын билдирет.

Foregene көбүрөөк илимий изилдөөчүлөргө эксперименттик убакытты жана чыгымдарды үнөмдөөгө, жогорку сапаттагы эксперименталдык натыйжаларды алууга жана биргелешип баалуу илимий изилдөө жетишкендиктерин түзүүгө жардам берүүнү көздөйт.