FAQ үчүнЖаныбарлардын жалпы РНК изоляциясынын комплекти

Сиз туш болушу мүмкүн болгон көйгөйлөрдү төмөнкү талдоожаныбардын кыртышынын/клетканын РНКсын алуу will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

РНК алынбайт же РНКнын түшүмдүүлүгү төмөн

Көбүнчө калыбына келтирүү эффективдүүлүгүнө таасир этүүчү ар кандай факторлор бар, мисалы: кыртыш үлгүсүндөгү РНКнын мазмуну, иштөө ыкмасы, элюция көлөмү ж.б.

1. Иш учурунда муз ваннасы же криогендик (4 °C) центрифугалоо жүргүзүлдү.

Сунуш: Бөлмө температурасында (15-25°С) бүт процессти иштетиңиз, муз ваннасын жана төмөнкү температурада центрифугага салбаңыз.

2. Үлгүлөрдү туура эмес сактоо же ашыкча үлгү сактоо убактысы.

Сунуш: Үлгүлөрдү -80 °C температурада сактаңыз же суюк азотто тоңдуруңуз жана тоңдуруу-эрүү процессин кайталап колдонуудан качыңыз;РНКны алуу үчүн жаңы кыртыштарды же культураланган клеткаларды колдонууга аракет кылыңыз.

3. Үлгү лизисинин жетишсиздиги.

Сунуш: тканды гомогенизациялоодо, кыртыштын жетиштүү гомогендештирилгендигин жана ткандын клеткалары РНКнын чыгарылышын түшүндүрүү үчүн жетиштүү түрдө бөлүнгөндүгүн камсыз кылыңыз.

4. Элюент туура эмес кошулган.

Сунуш: RNase-Free ddH экенин ырастаңыз₂О тазалоочу колонка мембранасынын ортосуна тамчылатып кошулат.

5. Абсолюттук этанолдун туура көлөмү Buffer RL2 же Buffer RW2 кошулган эмес.

Сунуш: нускамаларды аткарыңыз, RL2 буферине жана RW2 буферине абсолюттук этанолдун туура көлөмүн кошуп, комплектти колдонуудан мурун жакшылап аралаштырыңыз.

6. Ткань үлгүсүнүн дозасы ылайыктуу эмес.

Сунуш: 10-20 мг кыртыш же (1-5) × 10 колдонуңуз⁶500 мкл буфер RL1 үчүн клеткалар, анткени ткандарды ашыкча колдонуу РНКнын экстракциясын азайтууга алып келиши мүмкүн.

7. Туура эмес элюция көлөмү же толук эмес элюция.

Сунуш: Тазалоо колонкасынын элюциялык көлөмү 50-200 мкл;эгерде элюция эффектиси канааттандырарлык болбосо, алдын ала ысытылган RNase-Free ddH кошкондон кийин бөлмө температурасында жайгаштыруу убактысын узартуу сунушталат.₂О, мисалы, 5-10 мүнөткө.

8.Тазалоо тилкесинде Buffer RW2 жуугандан кийин этанол калдыктары бар.

Сунуш: Буфер RW2 жуугандан кийин этанолдун калдыктары болсо, бош түтүктү 1 мүнөт центрифугалоо, бош түтүктү центрифугалоо операциясынын убактысын 2 мүнөткө чейин көбөйтүүгө болот, же калдык этанолду адекваттуу түрдө алып салуу үчүн тазалоо тилкесин бөлмө температурасында 5 мүнөткө коюуга болот.

Тазаланган РНК бузулат

Тазаланган РНКнын сапаты үлгүнүн сакталышы, RNase булганышы жана манипуляция сыяктуу факторлорго байланыштуу.

1. Ткандын үлгүлөрү өз убагында сакталбайт.

Сунуш: Эгерде кыртыштын үлгүлөрү же клеткалар чогултулгандан кийин өз убагында колдонулбаса, дароо -80 °C же суюк азотто криоконсервацияланыңыз.РНКны алуу үчүн, мүмкүн болушунча жаңы алынган кыртыш же клетка үлгүсүн колдонуңуз.

2. Кыртыштын үлгүлөрүн кайра-кайра тоңдуруу.

Сунуш: ткандардын үлгүлөрүн сактоодо сактоо үчүн аларды майда бөлүктөргө кесип, үлгүнүн кайра-кайра тоңуп эрүүсүнө жана РНКнын деградациясына жол бербөө үчүн аларды колдонууда бөлүктөрүнүн бирин алып салуу жакшы.

3. Операция учурунда RNase киргизилет же бир жолу колдонулуучу кол кап, беткап ж.б. кийбейт.

Сунуш: РНКны экстракциялоо эксперименттери эң жакшы өзүнчө РНК манипуляциялык бөлмөлөрдө аткарылат жана үстөл эксперимент алдында тазаланат.

Эксперимент учурунда RNase киргизүү менен шартталган РНК деградациясын азайтуу үчүн бир жолу колдонулуучу кол каптарды жана маскаларды кийиңиз.

4. Реагенттер колдонуу учурунда RNase менен булганган.

Сунуш: Тиешелүү эксперименттер үчүн жаны жаныбарлардын жалпы РНК изоляциялык комплекти менен алмаштырыңыз.

5. РНКны манипуляциялоодо колдонулган центрифуга түтүктөрү, учтары ж.б. RNase менен булганган.

Сунуш: РНКны экстракциялоодо колдонулган центрифуга түтүктөрүнүн, учтардын, пипеткалардын жана башкалардын бардыгы RNaseсиз экенин ырастаңыз.

Тазаланган алынган РНК төмөнкү агымдагы эксперименттерге таасир этет

Тазалоо тилкесинде тазаланган РНК, эгерде туз иондору, белоктун мазмуну өтө чоң болсо, төмөнкү агымдагы экспериментке таасир этет, мисалы: тескери транскрипция, Northern Blot et al.

1. Элюцияланган РНКда туз ионунун калдыктары бар.

Сунуш: RW2 буферине этанолдун туура көлөмү кошулганын ырастаңыз жана операция үчүн көрсөтүлгөн центрифугалык ылдамдыкта 2 тазалоо тилкесин жууп көрүңүз;кандайдыр бир туз ионунун калдыктары бар болсо, тазалоо тилкесин RW2 буферине бөлмө температурасында 5 мүнөткө калтырыңыз жана туздун булганышын максималдуу түрдө жок кылуу үчүн центрифугалоо жүргүзүңүз.

2. Эллюзияланган РНКдагы этанолдун калдыгы.

Сунуш: RW2 буферин жуугандан кийин, бош түтүктү центрифугалоо операциясын операция үчүн көрсөтүлгөн центрифугалоо ылдамдыгы менен аткарууну ырастаңыз, эгерде этанолдун калдыктары дагы эле болсо, бош түтүктү центрифугалоо операциясынын убактысын 2 мүнөткө чейин көбөйтүңүз же центрифугалоочу бош түтүктү максималдуу кайра алуу үчүн 5 мүнөткө бөлмө температурасында калтырыңыз.

Нульцеин кислотасынын үлгүлөрүнүн түрлөрүн изоляциялоо

Foregene'нин РНК изоляциялык комплекттери төмөнкү үлгүдөгү сорпалардан жалпы РНК изоляциясын/экстракциясын ала алат: Жаныбарлардын ткандары, өсүмдүк, клеткалар, вирустук, кан ж.б.

Комплектти кантип сактайм

24 ай бою бөлмө температурасында сактоо.