коргошун

Узун коддолбогон РНК, lncRNA узундугу 200 нуклеотидден ашкан, жалпысынан 200-100000 нт ортосундагы коддолбогон РНК.lncRNA эпигенетикалык, транскрипция жана посттранскрипция деңгээлинде ген экспрессиясын жөнгө салат жана X-хромосоманын тыйылышына, геномдун импрингине жана хроматиндин модификациясына, транскрипцияны активдештирүүгө, транскрипциянын интерференциясына, ядролук ташууга, клетка циклин жөнгө салууга, клетканын дифференциациясын жөнгө салууга жана башка көптөгөн таасирлерди компенсациялоого катышат. адам ооруларынын пайда болушуна, өнүгүшүнө жана алдын алууга жана азыркы учурда биомедицина тармагындагы ысык чекиттердин бири болуп саналат.

01  LncRNAнын түрлөрү жана мүнөздөмөлөрү

lncRNA жогорудагы сүрөттө көрсөтүлгөндөй, пайда болуу булактары боюнча көптөгөн түрлөргө бөлүнөт.Төмөнкү өзгөчөлүктөргө ээ:

1. lncRNAs адатта узунураак, динамикалык экспрессия жана дифференциация учурунда ар кандай сплайсинг ыкмалары менен
2. Коддоочу гендерге салыштырмалуу, lncRNA адатта төмөнкү экспрессия деңгээлине ээ
3. Көпчүлүк lncRNAs ткандардын дифференциация жана өнүгүү процессинде ачык убакыттык жана мейкиндик экспрессия өзгөчөлүгүнө ээ.
4. Шишиктерде жана башка ооруларда мүнөздүү көрүнүштөр бар
5. lncRNAнын клетка алдындагы жайгашуусу ар түрдүү
6. Сактоо ырааттуулугу төмөн, бирок функциянын белгилүү бир деңгээлде сакталышы ж.б.

02 LncRNA тескери транскрипциясы жөнүндө көп берилүүчү суроолор

Клеткалардагы lncRNAнын аздыгынан, узун узундуктагы жана жогорку деңгээлдеги түзүлүштөн улам, мындай РНК көбүнчө өзөк илмектери же чач кычкалары сыяктуу татаал структураларга ээ жана RT-qPCR ийгиликсиз тескери транскрипция же төмөн эффективдүү көйгөйлөргө жакын.

03 LncRNA тескери транскрипция чечими

Борбордук эрежеде РНК вирустарынын РНКны шаблон катары колдонуп ДНКны синтездөө үчүн өздөрүнүн тескери транскриптазасын колдонуу процесси тескери транскрипция деп аталат.КДНК шаблонун in vitro синтездөө үчүн РНК вирусунун тескери транскриптазасын колдонуу процесси тескери транскрипция деп аталат.Тескери транскрипция системасына кирген негизги элементтер: РНК шаблону, тескери транскриптаза, праймерлер жана башка компоненттер.

1.РНК шаблону

РНК шаблонунун тескери транскрипцияга тийгизген таасири анын түзүлүшү, тазалыгы жана бүтүндүгүндө чагылдырылат.Алынган РНКнын тазалыгы жана бүтүндүгү канчалык жогору болсо, тескери транскрипциянын эффективдүүлүгү ошончолук жогору жана кийинки сандык натыйжалар ошончолук так болот.Көбүнчө колдонулган РНК экстракциялоочу реагенттер менен тазаланган РНКда көбүнчө спирттин жана гуанидин туздарынын калдыктары болот, алар көпчүлүк тескери транскриптазага күчтүү ингибитордук таасир этет.

2. Тескери транскриптаза

Тескери транскриптаза бүт тескери транскрипция системасына негизги таасир этет.Көпчүлүк лабораторияларда колдонулган тескери транскриптаза үчүн ылайыктуу температура жалпысынан 42°C.Чындыгында, жогорку деңгээлдеги РНК түзүлүшүнүн ачылышы жогорку температураны талап кылат, ал эми тескери транскриптаза үчүн талаптар жогору.

3.Primer

Тескери транскрипция праймерлерине генге тиешелүү праймерлер, туш келди праймерлер жана Олиго dT праймерлер кирет.Көпчүлүк lncRNAs полиА куйруктарын камтыбайт жана Oligo dT менен туш келди праймерлерди туура дал келтирүү маанилүү.

4. Башка компоненттер

РНКны деградациялоо өзгөчө оңой экендигин эске алуу менен, тескери транскрипция системасына компоненттердин киргизилишин минималдаштырса болот, бул RNase киришин натыйжалуу алдын алат жана тескери транскрипциянын бир калыпта жүрүшүн камсыздай алат.

FорегенРНК шаблонунан, qPCRге тескери транскрипциядан алат

lncRNA аныктооңузду ар тараптуу коштоп жүрүңүз

Жаныбарлардын жалпы РНК IсоляцияКомплект (гДНКны жок кылуу тилкеси менен)

Клетканын жалпы РНК IсоляцияКомплект (гДНКны жок кылуу тилкеси менен)

Lnc-RT HeroTM I(gDNase менен)(lncRNAдан биринчи катардагы cDNA синтези үчүн супер премикс)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Aартыкчылыктары ofРНК экстракциясы:

Комплект үчүнчү муундагы РНК алуу технологиясын колдонот, DNase колдонуунун кереги жок.

11 мүнөт 96, 24, 12 жана 6-кудуктуу табак маданияттуу клеткалар, gDNA-эркин, жогорку таза, жогорку сапаттагы жалпы клетка РНК жогорку натыйжалуу экстракция.

lncRNA тескери транскрипциясынын артыкчылыктары:

Геномдук ДНКнын булганышын тез алып салуу үчүн LncRNA үчүн атайын иштелип чыккан тескери транскрипция системасы.

Тескери транскрипция системасы жогорку жылуулук туруктуулугуна ээ жана дагы эле 50°C тескери транскрипциянын жакшы көрсөткүчүнө ээ.

Жогорку GC мазмуну жана татаал экинчи структурасы бар шаблондорду жогорку эффективдүүлүк менен артка кайтарууга болот.

Артыкчылыктарыof qПТР:

Hot start Foregene Taq Polymerase жогорку күчөтүү эффективдүүлүгүнө, жогорку күчөтүү сезгичтигине жана күчөтүү өзгөчөлүгүнө ээ.

Оптималдаштырылган Real PCR Easy Mix SYBR Green Iди аныктоонун сезгичтигин жогору кылат жана анын флуоресценция интенсивдүүлүгү окшош продуктуларга караганда 3-5 эсе жогору, бул флуоресценттик сандык эксперименттердин ар кандай түрлөрүнүн муктаждыктарын канааттандыра алат.