Лабораториялык тестирлөө үлгүлөрдү алуу менен башталат жана үлгүлөрдү чогултууга көңүл бурбоо эң оңой.Үлгүлөрдү алуу үчүн эң маанилүү нерсе туура үлгү түрүн тандоо, тиешелүү үлгүлөрдү алуу куралдарын колдонуу жана акылга сыярлык ташуу жана кайра иштетүү болуп саналат.

I. Үлгү түрү

Жалпы үлгү түрлөрү болуп төмөнкүлөр саналат:

Тандоо ыкмасы айыл чарба соода (базар) базарында жаңы коронавирустун экологиялык мониторингинин техникалык спецификацияларына кайрылышы мүмкүн”:

1. Тампон тампондорунан, практиктердин колунан, кийиминен жана башка буюмдарынан тампондун үлгүлөрү: вирустун пробасын алуу үчүн түтүктө вирусту сактоочу эритмени колдонуу жана үлгү алуу кебездерин толук инфильтрациялоо талап кылынат.Жердин үстү) кайра-кайра сүйкөп, 3 жолудан ашык чайкалат.Ошол эле учурда үлгү алынган объекттин бетинде көп чекиттүү бөлүштүрүлгөн үлгүлөрдү алуу зарыл.

2. Тамак-аштын бетиндеги тампон үлгүлөрү: Тамак-аш үлгүлөрүн түздөн-түз чогултуу мүмкүн эмес.Чогулта турган тамак-аш тампон үлгүлөрүн алуудан мурун кылдаттык менен бөлүнүп, таза үлгүлөрдү алуу баштыгында сакталышы керек.Вирустун үлгүсүн алуу үчүн түтүкчөдөгү вирусту сактоочу эритмени колдонуу, үлгү алуу кебез тампонун толук суулагандан кийин, 3 жолудан ашык чогултула турган тамак-аш үлгүсүнүн бетин кайра-кайра сыйпоо жана чайкоо керек.Ошол эле учурда үлгү бетинде көп чекиттүү бөлүштүрүлгөн үлгүлөрдү алуу зарыл.

3. Саркынды суулардын үлгүлөрү: Рынокто дренаждык системанын бөлүштүрүлүшүнө ылайык, ички түтүк тармагынын коллекциясына, суунун агымынын ылдыйкы агымына же муниципалдык түтүк тармагы менен байланышка басым жасоо менен 2-3 канализациядан үлгү алуу жерин тандаңыз.Тампондун үлгүсүн чогултуу үчүн аны агынды сууга адсорбциялоо үчүн үлгү алуу кебез тампону менен аны чөмүлдүрүңүз жана пробаны алуу түтүкчөсүндө 3 жолудан ашык чайкаңыз.Саркынды суулардын үлгүлөрүн чогултуу үчүн 30-500 мл саркынды суулардын үлгүлөрүн чогултуу үчүн полиэтилен пластик бөтөлкөлөрдү колдонуңуз;Көлөмү 500 млден ашкан саркынды сууларды чогултуу үчүн полиэтилен пластик челектерди же жеринде суунун үлгүсүн алуу үчүн атайын байытуу жабдууларын колдонсо болот.Ошол эле учурда саркынды суулардан үлгү алуу үчүн көп чекиттүү бөлүштүрүлгөн үлгүлөрдү алуу зарыл.

4. Жаныбарлардын үлгүлөрү: Тирүү жаныбарлар үчүн үлгү алуу тампондору дене бетиндеги тампондорду, орофарингеалдык тампондорду жана анал тампондорун чогултуу үчүн колдонулушу мүмкүн, ошондой эле экскремент же секреция үлгүлөрү да чогултулуп, эсепке алуу баракчасына жазылышы мүмкүн.Териси сыйрылган жаныбарлардын үлгүлөрү үчүн жана башкалар үчүн алардын дене бетинин жана дене көңдөйүнүн тампон үлгүлөрүн чогултуу үчүн кебез тампондорун колдонуңуз.Вирустун үлгүсүн алуу түтүкчөсүндөгү вирусту сактоочу эритмени үлгү алуу кебез тампонуна толук инфильтрациялоо үчүн колдонуу керек, андан кийин чогултула турган тамак-аш үлгүсүнүн бетине колдонууну кайталоо керек.Шабу 3 эседен ашык.Ошол эле учурда үлгү бетинде көп чекиттүү бөлүштүрүлгөн үлгүлөрдү алуу зарыл.

5. Башка приборлор: капас же балык сактагыч сыяктуу жаныбарларды ташуу жана көбөйтүү үчүн контейнерлер.Биринчиден, идиштин ичинде сакталган жана өстүрүлгөн жаныбарлардын белгилүү бир түрлөрүн байкап же түшүнүп, идиштин ички дубалына тампондун үлгүлөрүн же мазмундун суюк үлгүлөрүн чогултуңуз.

6.Аэрозоль үлгүлөрүн эл чогулган жерлерде, начар желдетилген жергиликтүү соода аянттарында, кеңселерде жана эс алуу бөлмөлөрүндө чогултуу.

II. Үлгү алуу куралдары
1. Кан алуу түтүгү
Эгер кийинчерээк нуклеин кислотасын текшерүү жана антикоагулянттык үлгүлөрдү алуу керек болсо, канды чогултуу үчүн ЭДТА антикоагулянты бар вакуумдук кан тамырды колдонуу сунушталат;сыворотка үлгүлөрү үчүн антикоагулянты жок вакуумдук кан тамырды колдонуу сунушталат.

2. Үлгү алуу тампону

Кальций алгинаты тампондорунун же жыгач мамылуу тампондордун ордуна полипропилен тампондорун колдонуу сунушталат, анткени аларда айрым вирустарды инактивациялоочу жана ПЦР тестине тоскоол болгон заттар болушу мүмкүн.Кебез баштары бар тампондорду колдонууга болбойт, анткени пахта булалары белоктун күчтүү адсорбциясына ээ жана кийинки консервация эритмесинде оңой эле элюцияланбайт.

“Жаңы коронавирустук нуклеиндик кислоталарды 10-до 1 аралашма чогултуунун жана аныктоонун Техникалык спецификациясында” “үлгү алуу тампону полиэстерден, нейлондон жана башка пахта жана кальций эмес альгинат материалдарынан жасалышы керек, ал эми туткасы жыгач эмес материалдан жасалышы керек” деп так белгиленген.Сынуу чекити тампондун башынын үстүнкү бөлүгүнөн болжол менен 3 см аралыкта, аны сындыруу оңой».

Америка Кошмо Штаттарындагы CDC ошондой эле "Пластик же зым шахталары бар синтетикалык була тампондорун гана колдонуңуз.Кальций алгинаты тампондорун же жыгач стволдору бар тампондорду колдонбоңуз,анткени аларда кээ бир вирустарды инактивациялоочу жана ПЦР тестине бөгөт коюучу заттар болушу мүмкүн.

Азыркы учурда пластикалык таяк менен айкалышкан бир жолу колдонулуучу стерилдүү нейлон тампону кеңири колдонулат.Топтолгон тампондун сууну жакшы сиңирүү жана чыгаруу ылдамдыгы бар.Ар кандай үлгүлөрдү алуу сайттарына ылайык, тампондун башынын да ар кандай өлчөмдөрү жана жипчелери бар.Калыңдыгы.”

3. Үлгү транспортун сактоо чечими

Вирусту инактивациялоону сактоочу эритме: гуанидин тузунун тиешелүү өлчөмү жана вирус лизисинин ар түрдүү компоненттери нуклеин кислотасын чыгаруу үчүн вирусту түздөн-түз лизиске алып, RNase жана DNase активдештирбестигин жана нуклеин кислотасынын бүтүндүгүн камсыздай алат, ал кийинки qPCR аныктоо үчүн колдонулушу мүмкүн.Аны вирусту өстүрүү жана изоляциялоо үчүн колдонууга болбойт.

Вирусту ташуу жана консервациялоочу эритме: анын курамында вирустун активдүүлүгүн сактай турган, вирустун жашоосу үчүн зарыл болгон туздар, аминокислоталар, витаминдер, глюкоза жана белок бар.Ал келечекте вирусту нуклеин кислотасын алуу жана аныктоо үчүн колдонулушу мүмкүн, ошондой эле вирусту өстүрүү жана бөлүү үчүн да колдонулушу мүмкүн.

4. Үлгү сактоочу түтүк жана үлгү баштыгы

Үлгүлөрдү сактоочу түтүк нуклеин кислотасын адсорбциялоочу бурамалы капкагы бар стерилдүү пластик түтүк болушу керек.Ар бир үлгү түтүгү үлгүнүн агып кетишин жана булганышын болтурбоо үчүн үлгү баштыгы менен жабылышы керек.

III.Үлгүдөгү кийлигишүүчү заттар

ПЦР эксперименттериндеги кийлигишүүчү заттар

1. эндогендик интерференция

Дене үлгүсүндөгү заттар башка заттарды аныктоого тоскоол болушу мүмкүн.

Кан:гем (>1мг/мл), гемин (>0,1нг/мкл), триглицериддер, IgG ж.б.;

Заара:карбамид (20мМ);

Таблетка:өсүмдүк полисахариддери, холат;

кыртыш:протеаза, коллаген;

Сүт: протеаза, кальций иону;

Дарылар: антибиотиктер, вируска каршы дарылар, гормондор ж.б.

башка.

2. экзогендик интерференция

Бул in vitro башка заттарды аныктоого тоскоол боло турган заттардан келет.Үлгүлөрдү алууда жана кайра иштетүүдө байланышууга мүмкүн болгон кошумчалар жана заттар:

Сыноо материалдары: сыворотка бөлүүчү гель, үлгүлөрдү алуу үчүн контейнер жана резина тыгын, катетер, катетерди жуугуч суюктук, кол кап порошок ж.б.

Антикоагулянт: гепарин (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 мМ) ж.б.;

Органикалык эриткичтер: изопропанол (>0,1 ХБ/мл), бетаин, диметилсульфоксид, формамид, глицерин, ПЭГ ж.б.;

Дезинфекциялоочу каражаттар: спирттер (этанол>1%), альдегиддер, фенолдор (фенол>0,2%), пероксиддер, күчтүү кислоталар (HCL), күчтүү щелочтор (NaOH) ж.б.;

Жуучу каражат:SDS (>0,005%);

Топурак: Humus

Боёк: Indigo

башка.

Айлана-чөйрөнүн үлгүлөрүн чогултуу сыяктуу иш жүзүндөгү сырткы үлгүлөрдү алуу шарттарында үлгүлөр ар кандай тоскоолдук кылуучу заттарды камтышы мүмкүн жана ар бир жерде кийлигишүүчү заттардын курамы ар башка, бул ПЦР интерференция эксперименттерин жергиликтүү шарттарга ылайык жүргүзүүнү талап кылат.

IV.Үлгү сактоо жана ташуу шарттары

Жаңы чогултулган клиникалык үлгүлөр чогултулгандан кийин 2-4 сааттын ичинде 2°Cден 8°Cге чейинки температурада лабораторияга жөнөтүлүшү керек.4℃ температурада 24 саат ичинде сактаңыз.Вирусту изоляциялоо жана нуклеин кислотасын аныктоо үчүн колдонулган үлгүлөр мүмкүн болушунча тезирээк текшерилиши керек.24 сааттын ичинде сыналышы мүмкүн болгон үлгүлөрдү 4°C температурада сактоого болот;24 сааттын ичинде аныкталбаган үлгүлөрдү -70°C же андан төмөн температурада сактоо керек (эгер андай болбосо - 70°C, муздаткычта -20°C).

Кыскача маалымат:Үлгүлөрдү стандартташтырылган чогултуу, ташуу жана сактоо кийинки сыноолор үчүн абдан маанилүү.Көптөгөн лабораториялык изилдөөлөрдүн жалган терс натыйжалары вирустук нуклеин кислотасынын деградациясына алып келген үлгүлөрдү туура эмес чогултуу, ташуу жана сактоо менен шартталган.Бирок, көптөгөн лабораториялар дагы эле үлгүлөрдү алуунун маанилүүлүгүн этибарга алышпайт.Бул макала үлгү алууга ар бир адамдын көңүлүн ойготуп, илимий жана акылга сыярлык тандоо жасай алат деп ишенем!

Тектеш продукт:

SARS-CoV-2 Variant Nuclein Acid Detection Kit (I) (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) – Бразилиядан, Түштүк Африкадан жана Улуу Британиядан келген мутанттарды аныктоо үчүн