Полисахариддерге жана полифенолдорго бай өсүмдүктөр үчүн жалпы РНК изоляциясынын комплекти Plus жалпы РНКны тазалоочу комплект
Комплекттин сүрөттөлүшү:
Cat.No.RE-05021/05022/05024
Жогорку полисахарид жана полифенол компоненттерин камтыган жалпы өсүмдүк үлгүлөрүнүн жалпы РНКны тазалоо үчүн.
Полисахариддердин жана полифенолдордун жогорку мазмуну бар өсүмдүк үлгүлөрүнөн жогорку сапаттагы жалпы РНКны тез бөлүп алыңыз.
RNase-Free ДНК-тазалоо тилкесин колдонуу
Жөнөкөй — бардык операциялар бөлмө температурасында аткарылат
Тез — операция 30 мүнөттүн ичинде бүтүшү мүмкүн
Коопсуз – эч кандай органикалык реагент колдонулбайт 
Техникалык шарттар
50 даярдык, 200 даярдык
Комплект Foregene тарабынан иштелип чыккан спиндик мамычаны жана формуланы колдонот, ал ар кандай өсүмдүктөрдүн ткандарынан жогорку тазалыктагы жана жогорку сапаттагы жалпы РНКны жогорку полисахариддер же полифенолдор менен натыйжалуу бөлүп алат.Ал геномдук ДНКны супернатанттан жана кыртыш лизатынан оңой алып салуучу ДНК-тазалоо тилкесин камсыз кылат.РНК гана мамычасы РНКны натыйжалуу байланыштыра алат.Комплект бир эле учурда көп сандагы үлгүлөрдү иштете алат.
Бүтүндөй система RNase камтыбайт, ошондуктан тазаланган РНК бузулбайт.Buffer PRW1 жана Buffer PRW2 алынган РНКнын белок, ДНК, иондор жана органикалык кошулмалар менен булганбагандыгын камсыздай алат.
Комплекттин компоненттери
| PSL1 буфери, PS буфери, PSL2 буфери |
| PRW1 буфери, PRW2 буфери |
| RNase-Free ddH2О, ДНК-тазалоо тилкеси |
| РНК гана тилкеси |
Өзгөчөлүктөрү жана артыкчылыктары
■ Бүт процесс бою бөлмө температурасында (15-25℃) иштөө, муз ваннасы жана төмөнкү температурадагы центрифугасыз.
■ RNase-Free толук комплект, РНКнын бузулушу жөнүндө тынчсыздануунун кереги жок.
■ РНКны полисахариддердин жана полифенолдордун өсүмдүк үлгүлөрүнөн тазалоо үчүн өзгөчө ылайыктуу.
■ ДНК-тазалоо тилкеси атайын ДНК менен байланышат, андыктан комплект DNase кошпостон геномдук ДНКнын булганышын жок кыла алат.
■ РНКнын жогорку түшүмдүүлүгү: РНК гана мамычасы жана уникалдуу формула РНКны эффективдүү тазалай алат.
■ Тез ылдамдык: иштетүү оңой жана 30 мүнөттүн ичинде бүтүрүүгө болот.
■ Коопсуздук: эч кандай органикалык реагент талап кылынбайт.
■ Жогорку сапат: Тазаланган РНК фрагменттери жогорку тазалыкка ээ, белок жана башка аралашмалар жок жана ар кандай ылдыйкы эксперименттик колдонмолорго жооп бере алат.
Продукт параметрлери
■ Төмөнкү колдонмолор: биринчи катардагы cDNA синтези, RT-PCR, молекулярдык клондоштуруу, Northern Blot ж.б.
■ Үлгү: полисахариддердин жана полифенолдордун жаңы же тоңдурулган өсүмдүк ткандары
■ Дозасы: 50мг өсүмдүк кыртышы
■ Тазалоо тилкесинин максималдуу РНКны байланыштыруу жөндөмдүүлүгү: 80 мкг
■ Элюциянын көлөмү: 50-200 мкл
Kit колдонмосу
Бул жогорку полисахарид жана полифенол мазмуну менен жаңы же тоңдурулган өсүмдүк кыртышынын үлгүлөрүнөн (өзгөчө жаңы өсүмдүк жалбырак кыртышынан) жалпы РНКны алуу жана тазалоо үчүн ылайыктуу.
Иш агымы
Диаграмма
Plant Total RNA Isolation Kit Plus полисахариддердин жана полифенолдордун 50 мг жаңы жалбырактарын иштетип, 5% тазаланган РНК электрофорез менен сыналды.
1: Банан
2: Гинкго
3: Пахта
4: Анар
Сактоо жана сактоо мөөнөтү
Бул комплект бөлмө температурасында (15-25 ℃) кургак шарттарда 24 ай бою сакталышы мүмкүн;узак убакытка сактоо керек болсо, 2–8℃ температурада сактаса болот.
PSL1 буферин β-меркаптоэтанолду кошкондон кийин 1 ай бою 4℃ температурада жайгаштырууга болот (аны эксперимент учурунда кошуу сунушталат).
Колонка жабылды
Колонка тыгындалгандан кийин РНКнын түшүмдүүлүгү азаят же ал тургай РНКны тазалоо мүмкүн эмес жана алынган РНК массасы аз болот.
Жалпы себептерди талдоо:
1. Үлгү тыныгуулар кылдат эмес.
Үлгүлөрдүн бузулушу РНКнын түшүмдүүлүгүнө жана сапатына таасирин тийгизип, ДНК-ТАЗАЛОО КОМПАНЫНЫН толугу менен бүтөлүшүнө алып келбейт.Үлгүлөрдү сындырып жатканда жетиштүү суюк азотто тез майдалоону сунуштайбыз, үлгү клетка дубалын, клетка мембранасын жана башка кыртыштарды майдалоого аракет кылыңыз.Полиол полисахариддердин өсүмдүк үлгүлөрү үчүн Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS колдонууну сунуштайбыз.
2. Бөлүнгөн үлгүнүн супернатантын ДНК-тазалоо тилкеси менен соргондо, клетканын фрагменттелген мүмкүн болгон чөкмөсүн дем алууга болот.
Кабыл алынган клетканын фрагменттелген чөкмөлөрү РНКны адсорбциялоо операциясы аткарылганда бөгөттөлгөн РНК-ГАНА мамычаны пайда кылат (6-кадамды караңыз).Клетка калдыктары сорулуп калбашы үчүн, бул супернатантты соруп жатканда кылдаттык менен сунуштайбыз.
3. Үлгүнүн баштапкы суммасы өтө көп.
Үлгүнүн ашыкча колдонулушу үлгүнүн толук эмес фрагментациясына же PSL1 буфери тарабынан клетканын толук эмес лизисине алып келет, натыйжада тазалоо учурунда тазалоо тилкесинин бөгөлүшүнө алып келет.Өсүмдүктүн жалпы РНК изоляциясынын комплекти Ар бир тазаланган операциялык үлгү 50 мг.Полиол полисахариддеринин өсүмдүк үлгүлөрү үчүн Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS колдонуп көрүүнү сунуштайбыз.
4. Центрифуганын температурасы өтө төмөн.
Бүт РНКны изоляциялоо жана тазалоо процесси бөлмө температурасында (20-25°C), үлгү кыртыш суюк азот менен сынган тышкары. Кээ бир криогендик центрифугалардын температурасы 20 төмөн℃, бул ДНК-тазалоо тилкесинин жана/же РНК-гана тилкесинин бөгөлүшүнө алып келиши мүмкүн.Мындай болуп калса, центрифуганын температурасын 20-25ке коюңуз℃, жанализис аралашмасы жана/же этанол кошулган үстүнкү зат 37 градуска чейин ысытылганын текшериңиз°C.
Эч кандай РНК алынбайт же РНКнын түшүмү төмөн
Калыбына келтирүү эффективдүүлүгүнө таасир этүүчү көптөгөн факторлор бар, мисалы: үлгүдөгү РНКнын мазмуну, иштөө ыкмасы, элюция көлөмү ж.б.
Төмөндө жалпы себептерин талдоо:
1.Операция учурунда муз ваннасы же төмөнкү температурада (4°C) центрифугалоо жүргүзүлдү.
Сунуш: Бөлмө температурасында иштетиңиз (15-25°В) бүт процессте муз ваннасын жана төмөнкү температурада центрифугалоону жасабаңыз.
2.РНК үлгүнүн туура эмес сакталышынан же үлгүнүн узак мөөнөттүү сакталышынан улам бузулган.
Сунуш: Жаңы чогултулган үлгүлөр суюк азотто тез тоңдурулуп, андан кийин -80°Cде узак убакытка сакталууга тийиш, үлгүлөрдү кайра-кайра тоңдуруп жана эритүүдөн сактаңыз;же үлгүлөрдү дароо РНК стабилизатору RNAlater эритмесинде (жаныбар үлгүлөрү) чылап коюңуз.
3.Insufficient үлгү фрагментация жана лизис тазалоо мамычасынын бөгөт коюуга алып келет.
Сунуш: кыртышты майдалап жатканда, кыртыштын жетиштүү майдаланганын текшериңиз жана аны алдын ала даярдалган PSL1 буферине тез өткөрүп бериңиз (β-MEнин туура пропорциясы кошулганын ырастаңыз, процедуранын 1-кадамын караңыз).
4.Элюент туура эмес кошулган.
Сунуш: RNase-Free ddH2O тазалоо тилкесинин кабыкчасынын ортосуна тамчылатылышын текшериңиз.
5. абсолюттук этанолдун туура көлөмү Buffer PSL2 же Buffer PRW2 кошулган эмес.
Сунуш: Көрсөтмөлөрдү аткарыңыз, PSL2 буферине жана PRW2 буферине абсолюттук этанолдун туура көлөмүн кошуп, комплектти колдонуудан мурун жакшылап аралаштырыңыз.
кыртыш үлгүсүнүн 6.The суммасы туура эмес.
Сунуш: Buffer PSL1 500 мкл үчүн 50 мг кыртыш колдонуңуз.Өтө көп кыртышты колдонуу алынган РНКнын көлөмүн азайтат жана пайда болгон РНКнын тазалыгы да азаят.Биз катуу сунуштайбыз баштапкы үлгү дозасы РНК экстракциялоо операциясы үчүн 50 мг ашпоого тийиш.
7.Элюциянын туура эмес көлөмү же толук эмес элюция.
Сунуш: Тазалоо колонкасынын элюентинин көлөмү 50-200 мкл;эгерде элюция эффектиси канааттандырарлык болбосо, алдын ала ысытылган RNase-Free ddH2O кошкондон кийин бөлмө температурасында убакытты узартуу сунушталат, мисалы 5-10мин.
8.Тазалоо тилкесинде BufferPRW2 менен жуугандан кийин этанол калдыктары бар.
Сунуш: Эгерде бош түтүк 1 мүнөт центрифугаланса жана PRW2 буферинде жуугандан кийин дагы этанол калса, сиз бош түтүктү центрифугалоо убактысын 2 мүнөткө чейин көбөйтсөңүз болот, же калдык этанолду толугу менен алып салуу үчүн тазалоо тилкесин бөлмө температурасында 5 мүнөткө коюңуз.
9.Комплект туура эмес колдонулган.
Сунуш: Полифенолдук полисахариддердин өсүмдүк үлгүлөрү үчүн Өсүмдүктөрдүн жалпы РНК изоляциясынын комплекти сыяктуу жалпы комплекттерди колдонуу идеалдуу РНК үлгүлөрүн ала албашы мүмкүн.Полифенолдук полисахарид өсүмдүктөрүнүн үлгүлөрү үчүн атайын иштелип чыккан Plant Total RNA IsolationKit Plus колдонууну сунуштайбыз.Полифенол жана полисахарид өсүмдүктөрүнүн үлгүлөрүнөн РНКны алуу үчүн атайын иштелип чыккан комплект.
OD260/OD280 мааниси төмөн
РНКны ddH2O менен элюциялоо жана спектрофотометрдик көрсөткүчтөр үчүн колдонулган OD260/OD280 төмөн мааниге алып келет.Салыштырмалуу туура OD260/OD280 маанилерин алуу үчүн 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (РНКны элюциялоо үчүн RNase-Free ddH2O эмес) колдонууну сунуштайбыз, 19-беттеги “РНК концентрациясын жана тазалоо анализдерин” караңыз.
Тазаланган РНК бузулат
Тазаланган РНКнын сапаты үлгүлөрдү сактоо, RNase булганышы жана манипуляция сыяктуу факторлорго байланыштуу.
Жалпы себептерди талдоо:
1.Tissue үлгүлөрү чогултулгандан кийин өз убагында сакталган эмес.
Сунуш: Эгерде кыртыш үлгүлөрү чогултулгандан кийин өз убагында колдонулбаса, аларды дароо төмөн температурада суюк азотто сактаңыз же суюк азотто тез тоңдургандан кийин узак мөөнөткө сактоо үчүн аларды -80°Cге өткөрүп коюңуз, же үлгүлөрдү РНК стабилизаторунун RNAlater эритмесинде дароо чөмтүрүңүз (жаныбар үлгүлөрү).РНК алуу үчүн, жаңы чогултулган кыртыш үлгүлөрүн колдонууга аракет кыл.
2.Кайталанган тоңдуруу жана кыртыш үлгүлөрүн эрүү.
Сунуш: ткандардын үлгүлөрүн сактоодо сактоо үчүн аларды майда бөлүктөргө кесип, үлгүлөрдү кайра-кайра тоңдуруу жана эрүү аркылуу РНКнын деградациясын болтурбоо үчүн аларды колдонууда бир бөлүгүн алып салуу жакшы.
3.RNase операция бөлмөсүндө киргизилген же бир жолу колдонулуучу кол каптар, маскалар ж.б.
Сунуш: РНКны экстракциялоо боюнча эксперименттер өзүнчө РНК операцияларында эң жакшы аткарылат, ал эми лабораториялык үстөл экспериментке чейин тазаланышы керек, ал эми эксперимент учурунда РНКнын деградациясын эң чоң деңгээлде болтурбоо үчүн бир жолу колдонулуучу колкаптарды жана маскаларды кийүү керек.
4.Колдонуу учурунда реагент RNase менен булганган.
Сунуш: Тиешелүү эксперименттер үчүн өсүмдүктүн жалпы РНКсын экстракциялоо комплекттеринин жаңы сериясы менен алмаштырыңыз.
5.РНК менен иштөө үчүн колдонулган центрифуга түтүктөрү жана пипеткалардын учтары RNase менен булганган.
Сунуш: РНКны экстракциялоодо колдонулган центрифуга түтүктөрүнүн, пипеткалардын учтары, пипеткалар ж.б. баары RNase-эркин экендигин текшериңиз.
Instruction Manuals:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus Instruction Manual
