Полисахариддер жана полифенолдор аз өсүмдүк үчүн РНКны тазалоочу комплекс
Техникалык шарттар
50 даярдык, 200 даярдык
Комплект Foregene тарабынан иштелип чыккан спиндик мамычаны жана формуланы колдонот, ал полисахариддер жана полифенолдор аз болгон ар кандай өсүмдүк ткандарынан жогорку таза жана сапаттуу жалпы РНКны эффективдүү бөлүп алат.Жогорку полисахариддер же полифенолдор бар өсүмдүк үлгүлөрү үчүн РНКны экстракциялоонун жакшы натыйжаларын алуу үчүн Plant Total RNA Isolation Plus Kitти колдонуу сунушталат.Комплект геномдук ДНКны супернатанттан жана кыртыш лизатынан оңой алып салуучу ДНК-тазалоо тилкесин камсыз кылат.РНК гана мамычасы РНКны натыйжалуу байланыштыра алат.Комплект бир эле учурда көп сандагы үлгүлөрдү иштете алат.
Бүтүндөй система RNase камтыбайт, ошондуктан тазаланган РНК бузулбайт.Buffer PRW1 жана Buffer PRW2 алынган РНКнын белок, ДНК, иондор жана органикалык кошулмалар менен булганбагандыгын камсыздай алат.
Комплекттин компоненттери
| PSL1 буфери, PS буфери, PSL2 буфери |
| PRW1 буфери, PRW2 буфери |
| RNase-Free ddH2О, ДНК-тазалоо тилкеси |
| РНК гана тилкеси |
| Instructions |
Өзгөчөлүктөрү жана артыкчылыктары
■ Бүт процесс бою бөлмө температурасында (15-25℃) иштөө, муз ваннасы жана төмөнкү температурадагы центрифугасыз.
■ RNase-Free толук комплект, РНКнын бузулушу жөнүндө тынчсыздануунун кереги жок.
■ ДНК-тазалоо тилкеси атайын ДНК менен байланышат, андыктан комплект DNase кошпостон геномдук ДНКнын булганышын жок кыла алат.
■ РНКнын жогорку түшүмдүүлүгү: РНК гана мамычасы жана уникалдуу формула РНКны эффективдүү тазалай алат.
■ Тез ылдамдык: иштетүү оңой жана 30 мүнөттүн ичинде бүтүрүүгө болот.
■ Коопсуздук: эч кандай органикалык реагент талап кылынбайт.
■ Жогорку сапат: Тазаланган РНК фрагменттери жогорку тазалыкка ээ, белок жана башка аралашмалар жок жана ар кандай ылдыйкы эксперименттик колдонмолорго жооп бере алат.
Kit колдонмосу
Бул аз полисахарид жана полифенол мазмуну менен жаңы же тоңдурулган өсүмдүк кыртышынын үлгүлөрүнөн (өзгөчө жаңы өсүмдүк жалбырак кыртышынан) жалпы РНКны алуу жана тазалоо үчүн ылайыктуу.
Иш агымы
Диаграмма
Plant Total RNA Isolation Kit Plus полисахариддердин жана полифенолдордун 50 мг жаңы жалбырактарын иштетип, 5% тазаланган РНК электрофорез менен сыналды.
1: Банан
2: Гинкго
3: Пахта
4: Анар
Сактоо жана сактоо мөөнөтү
Комплект бөлмө температурасында (15–25 ℃) кургак чөйрөдө 12 ай, ал эми 2–8 ℃ узак убакытка (24 ай) сакталат.
PSL1 буферин 2-гидрокси-1-этанетиол (милдеттүү эмес) кошкондон кийин 1 ай бою 4 ℃ температурада сактоого болот.
Проблемаларды талдоо боюнча колдонмо
Сиз туш болушу мүмкүн болгон көйгөйлөрдү төмөнкү талдооӨсүмдүк жалпыRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Айлануучу колонка тыгылып калган
Спиндик мамычанын бөгөлүшү РНКнын түшүмдүүлүгүнүн азайышына же ал тургай РНКны алуу үчүн тазаланбай калышына алып келет жана алынган РНКнын сапаты төмөн болот.
Жалпы себептерди талдоо:
1. Үлгү толугу менен сынган эмес.
Үлгүнүн толук эмес фрагментациясы ДНК-тазалоо тилкесин бөгөттөп, РНКнын түшүмдүүлүгүнө жана сапатына таасир этиши мүмкүн.Үлгүлөрдү фрагментациялоодо үлгүлөрдүн клетка дубалдары жана клетка мембраналары сыяктуу кыртыштарды мүмкүн болушунча майдалоо үчүн суюк азоттун жетиштүү санында тез майдалоону сунуштайбыз.Полифенол полисахариддеринин өсүмдүк үлгүлөрү үчүн Plant Total RNA Isolation Kit Plus колдонууну сунуштайбыз.
2.ДНК-тазалоо колоннасынын изоляцияланган үстүнкү затын соруңуз, мүмкүн болгон клетка сыныктарын соруңуз.
Аспирацияланган клетка сыныктары РНКны адсорбциялоо процедуралары учурунда бир гана РНК тилкесин жабышы мүмкүн (процедуранын 5-кадамын, полисахарид полифенол процедурасынын 6-кадамын караңыз).Клетка калдыктары аспирацияланбашы үчүн бул супернатантты соруп жатканда сак болууну сунуштайбыз.
3. Үлгүнүн баштапкы көлөмү өтө чоң.
Үлгүнүн ашыкча колдонулушу үлгүнүн толук эмес фрагментациясына же клеткалардын PRL1 буфери же PSL1 буфери тарабынан толук эмес лизиске алып келет, натыйжада тазалоо операциялары үчүн тазалоо тилкеси бүтүп калат.Өсүмдүктүн жалпы РНК изоляциялык комплектинин баштапкы максимумы иштетилген үлгүнү бир жолу тазалоо үчүн 50 мг түзөт.Полифенол полисахариддеринин өсүмдүк үлгүлөрү үчүн Өсүмдүктөрдүн жалпы РНК изоляциясынын комплекти Plus сынап көрүүнү сунуштайбыз.
4. Центрифуганын температурасы өтө төмөн.
Үлгү кыртышынын суюк азот бузулушун кошпогондо, бүт РНК изоляциясы жана тазалоо, бардык кадамдар бөлмө температурасында (20-25 °C) аткарылат.Кээ бир төмөнкү температурадагы центрифугалардын температурасы 20 °Cден төмөн, бул ДНК-тазалоо тилкесинде жана/же РНК гана тилкесинде бөгөттөлөргө алып келиши мүмкүн.Эгер мындай болсо, центрифуганын температурасын 20-25 °Cге коюп, лизис аралашмасын жана/же этанолду бөлүүчү супернатантты 37 °Cге чейин алдын ала жылытыңыз.
Эч кандай РНК алынбайт же РНКнын түшүмү төмөн
Калыбына келтирүү эффективдүүлүгүнө таасир этүүчү көптөгөн факторлор бар, мисалы: үлгүдөгү РНКнын мазмуну, иштөө ыкмасы, элюция көлөмү ж.б.
Төмөндө жалпы себептерин талдоо:
1.Операция учурунда муз ваннасы же төмөнкү температурада (4°C) центрифугалоо жүргүзүлдү.
Сунуш: Бардык процессте бөлмө температурасында (15-25°C) иштетиңиз, муз ваннасын жана төмөнкү температурада центрифугалоону жасабаңыз.
2.РНК үлгүнүн туура эмес сакталышынан же үлгүнү узак мөөнөткө сактоодон улам бузулган.
Сунуш: Жаңы чогултулган үлгүлөр суюк азотто тез тоңдурулуп, андан кийин -80°Cде узак убакытка сакталууга тийиш, үлгүлөрдү кайра-кайра тоңдуруп жана эритүүдөн сактаңыз;же үлгүлөрдү дароо РНК стабилизатору RNAlater эритмесинде (жаныбар үлгүлөрү) чылап коюңуз.
3.Үлгүнүн жетишсиз фрагментациясы жана лизиси тазалоо тилкесинин бүтөлүшүнө алып келет.
Сунуш: кыртышты майдалап жатканда, кыртыштын жетиштүү майдаланганын текшериңиз жана аны алдын ала даярдалган PSL1 буферине тез өткөрүп бериңиз (β-MEнин туура пропорциясы кошулганын ырастаңыз, процедуранын 1-кадамын караңыз).
4.Элюент туура эмес кошулган.
Сунуш: RNase-Free ddH экенин текшериңиз2Тазалоо колоннасынын мембранасынын ортосуна О тамчылат.
5. абсолюттук этанолдун туура көлөмү Buffer PSL2 же Buffer PRW2 кошулган эмес.
Сунуш: Көрсөтмөлөрдү аткарыңыз, PSL2 буферине жана PRW2 буферине абсолюттук этанолдун туура көлөмүн кошуп, комплектти колдонуудан мурун жакшылап аралаштырыңыз.
кыртыш үлгүсүнүн 6.The суммасы туура эмес.
Сунуш: Buffer PSL1 500 мкл үчүн 50 мг кыртыш колдонуңуз.Өтө көп кыртышты колдонуу алынган РНКнын көлөмүн азайтат жана пайда болгон РНКнын тазалыгы да азаят.Биз катуу сунуштайбыз баштапкы үлгү дозасы РНК экстракциялоо операциясы үчүн 50 мг ашпоого тийиш.
7. Элюциянын туура эмес көлөмү же толук эмес элюция.
Сунуш: Тазалоо колонкасынын элюентинин көлөмү 50-200 мкл;эгерде элюция эффектиси канааттандырарлык болбосо, алдын ала ысытылган RNase-Free ddH кошкондон кийин бөлмө температурасында убакытты узартуу сунушталат.2О, мисалы, 5-10мин.
8.Тазалоо тилкесинде Buffer PRW2 менен жуугандан кийин этанол калдыктары бар.
Сунуш: Эгерде бош түтүк 1 мүнөт центрифугаланса жана PRW2 буферинде жуугандан кийин дагы этанол калса, сиз бош түтүктү центрифугалоо убактысын 2 мүнөткө чейин көбөйтсөңүз болот, же калдык этанолду толугу менен алып салуу үчүн тазалоо тилкесин бөлмө температурасында 5 мүнөткө коюңуз.
9.Комплект туура эмес колдонулган.
Сунуш: Полифенолдук полисахариддердин өсүмдүк үлгүлөрү үчүн Өсүмдүктөрдүн жалпы РНК изоляциясынын комплекти сыяктуу жалпы комплекттерди колдонуу идеалдуу РНК үлгүлөрүн ала албашы мүмкүн.Полифенолдук полисахарид өсүмдүктөрүнүн үлгүлөрү үчүн атайын иштелип чыккан Plant Total RNA IsolationKit Plus колдонууну сунуштайбыз.Полифенол жана полисахарид өсүмдүктөрүнүн үлгүлөрүнөн РНКны алуу үчүн атайын иштелип чыккан комплект.
OD260/OD280 мааниси төмөн
ddH менен РНК элюциясы2O жана спектрофотометрдин окуулары үчүн колдонулат, натыйжада OD260/OD280 көрсөткүчтөрү төмөн.Биз 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (RNase-Free ddH ордуна) колдонууну сунуштайбыз2салыштырмалуу туура OD260/OD280 маанилерин алуу үчүн, 19-беттеги “РНКнын концентрациясын жана тазалоо анализдерин” караңыз.
Тазаланган РНК бузулат
Тазаланган РНКнын сапаты үлгүлөрдү сактоо, RNase булганышы жана манипуляция сыяктуу факторлорго байланыштуу.
Жалпы себептерди талдоо:
1.Tissue үлгүлөрү чогултулгандан кийин өз убагында сакталган эмес.
Сунуш: Эгерде кыртыш үлгүлөрү чогултулгандан кийин өз убагында колдонулбаса, аларды дароо төмөн температурада суюк азотто сактаңыз же суюк азотто тез тоңдургандан кийин узак мөөнөткө сактоо үчүн аларды -80°Cге өткөрүп коюңуз, же үлгүлөрдү РНК стабилизаторунун RNAlater эритмесинде дароо чөмтүрүңүз (жаныбар үлгүлөрү).РНК алуу үчүн, жаңы чогултулган кыртыш үлгүлөрүн колдонууга аракет кыл.
2.Кайталанган тоңдуруу жана кыртыш үлгүлөрүн эрүү.
Сунуш: ткандардын үлгүлөрүн сактоодо сактоо үчүн аларды майда бөлүктөргө кесип, үлгүлөрдү кайра-кайра тоңдуруу жана эрүү аркылуу РНКнын деградациясын болтурбоо үчүн аларды колдонууда бир бөлүгүн алып салуу жакшы.
3.RNase операция бөлмөсүндө киргизилген же бир жолу колдонулуучу кол каптар, маскалар ж.б.
Сунуш: РНКны экстракциялоо боюнча эксперименттер өзүнчө РНК операцияларында эң жакшы аткарылат, ал эми лабораториялык үстөл экспериментке чейин тазаланышы керек, ал эми эксперимент учурунда РНКнын деградациясын эң чоң деңгээлде болтурбоо үчүн бир жолу колдонулуучу колкаптарды жана маскаларды кийүү керек.
4.Колдонуу учурунда реагент RNase менен булганган.
Сунуш: Тиешелүү эксперименттер үчүн өсүмдүктүн жалпы РНКсын экстракциялоо комплекттеринин жаңы сериясы менен алмаштырыңыз.
5.РНК менен иштөө үчүн колдонулган центрифуга түтүктөрү жана пипеткалардын учтары RNase менен булганган.
Сунуш: РНКны экстракциялоодо колдонулган центрифуга түтүктөрүнүн, пипеткалардын учтары, пипеткалар ж.б. баары RNase-эркин экендигин текшериңиз.
Instruction Manuals:
