Авторлору: Ван Сяоян, Чжао Эрю

Бөлүм: Цзяочжоу ооруканасы, Тунжи университетине караштуу Дунфан ооруканасы

Азыркы учурда дем алуу органдарынын патогендик нуклеиндик кислотасын аныктоо үчүн негизги үлгү түрү тамак тампону болуп саналат.Көп колдонулган үлгүлөрдү сактоо чечимдеринин көптөгөн түрлөрү бар, алардын бардыгын ташуу жана сактоо үчүн муздатуу же тоңдуруу керек;Бул жыйноо жана ташуу учурунда төмөн температуранын бүт жараянын көзөмөлдөө кыйын, ал эми үлгү тестирлөө алдында сапатын контролдоону камсыз кылуу кыйын^[1-2].

RNase (RNase) - бул РНКны гидролиздөөчү эндонуклеаза, негизинен нуклеотиддердин ортосундагы фосфодиэфир байланыштарын үзөт.RNase молекуласы абдан туруктуу, структурасында дисульфиддик байланыштар бар жана анын активдүүлүгү эки валенттүү катиондордун болушун талап кылбайт, ошондуктан RNase оңой денатураланбайт, ал тургай жогорку температурадан же денатуранттарды колдонуудан кийин да ренатурацияланышы оңой.РНазалар эндогендик жана экзогендик болуп бөлүнөт.Эндогендик RNases клеткалар жарылганда, ошол эле учурда бошотулушу мүмкүн.Ошондуктан, эндогендик RNases ролун жок кылуу РНК казып алуу жараянында абдан маанилүү кадам болуп саналат.Экзогендик RNases кеңири таралган.РНКлар абада, адамдын терисинде, чачында жана шилекейинде бар, бул РНКнын оңой бузулушунун маанилүү себептери.^[3].

Маалымат суроо

CANS-CL02-A009 "Молекулярдык диагностика чөйрөсүндө медициналык лабораториянын сапаты жана компетенттүүлүгүн аккредитациялоо боюнча көрсөтмөлөрдү колдонуу" техникалык талаптарда суунун сапатынын тийиштүү стандарттары өтүнмөгө ылайык түзүлүшү керек деп сунуш кылат;Бир жолу колдонулуучу герметикалык контейнерлер:

RNase/Classification

(1) RNase A

Рибонуклеаза А (RNase A), бодо уйку безинен алынган, бул эндорибонуклеаза, ал РНКдагы пиримидин калдыктарынын 3′ учуна кол салышы мүмкүн, цитозинди же чектеш нуклеотиддер менен түзүлгөн урацилди кесип алат.Фосфодиэфир байланышы, реакциянын акыркы продуктусу 3′ пиримидин нуклеотиди жана аягында 3′ пиримидин нуклеотиди бар олигонуклеотид болуп саналат.

(2) RNase T1

Рибонуклеаза T1 (RNase T1) Aspergillus orjzaeден алынган, ал өзгөчө гуаниндин 3′-терминалдык фосфатына таасир этет, ал эми бөлүнүү жери гуаниндин 3′ фосфаты менен чектеш нуклеотиддердин 5′ гидроксилинин ортосунда жайгашкан.Реакциянын акыркы продуктусу 3′гуанил кислотасы жана аягында 3′гуанил кислотасы бар олигонуклеотид фрагменттери.

(3) RNase H

Рибонуклеаза H (RNase H) биринчи жолу музоо тимус тканынан табылган жана анын коддоочу гени Escherichia coliге клондолгон.Ал атайын ДНКны начарлатышы мүмкүн: РНК гибриддик дуплекстериндеги РНК тилкелери, натыйжада 3′-OH жана 5′-монофосфат учтары бар олигонуклеотиддер жана мононуклеотиддер пайда болот, ал бир же эки тилкелүү ДНКны же РНКны буза албайт.

RNase

Функция жана колдонуу

Рибонуклеаза рибонуклеин кислотасынын (РНК) деградациясын катализдей алат жана жасалма жол менен синтезделет.Дары-дармек майы травма жана муундардын оорууларын дарылоодо колдонулат.Маалыматтарга ылайык, рибонуклеаза кабыл алуучу клетканын метаболизмин өзгөртүп, вирус синтезин бөгөттөп, in vitro грипп вирусунун көбөйүшүнө бөгөт коё алат жана тоок эмбриондорунда вакцина менен герпес вирусунун пайда болушуна бөгөт коё алат.Эпидемиялык энцефалитти дарылоо үчүн пайдалуу болгон рибонуклеазаны суткалык 180 мг-дык булчуңга инъекциялоо клиникалык колдонуу, рибонуклеаза рибонуклеиндик кислотанын (РНК) деградациясын катализдей алат жана азыр жасалма түрдө синтезделиши мүмкүн.Дары-дармек майы травма жана муундардын оорууларын дарылоодо колдонулат.Маалыматтарга ылайык, рибонуклеаза кабыл алуучу клетканын метаболизмин өзгөртүп, вирус синтезин бөгөттөп, in vitro грипп вирусунун көбөйүшүнө бөгөт коё алат жана тоок эмбриондорунда вакцина менен герпес вирусунун пайда болушуна бөгөт коё алат.Клиникалык рибонуклеазаны суткалык 180 мг-дык булчуңга сайуу эпидемиялык энцефалитти дарылоо үчүн пайдалуу.

RNase

Ингибитор аныктамасы

RNase ингибиторунун бирдигинин аныктамасы: 5ng RNase А активдүүлүгүнүн 50% бөгөт коюу үчүн зарыл болгон ферменттин көлөмү бир бирдик.

RNase ингибиторлору кантип иштешет

Гуанидин-изотиоцианат:

Guanidin isothiocyanate молекулярдык формула C2H6N4S менен органикалык бирикме болуп саналат.Негизинен биологиялык медицинада, химиялык реагенттерде ж.б. колдонулат. Гуанидин изотиоцианаты белокту лиздөөчү агент болуп саналат жана ал көбүнчө молекулярдык диагностикалык реагенттерде лизис эритмесинин негизги компоненти катары колдонулат.Ал ткандарды лизиске алып, клетканын түзүлүшүн бузуп, нуклеин кислотасын нуклеопротеинден ажырата алат жана RNaseге күчтүү денатурацияга ээ.Бул азыркы учурда эң натыйжалуу RNase ингибитору.

TRIzol – бул жалпы РНКны бөлүп чыгаруучу реагент, ал клеткалардан же ткандардан түздөн-түз жалпы РНКны бөлүп алат.Анын курамында фенол жана гуанидин-изотиоцианат сыяктуу заттар бар, алар клеткаларды тез бузуп, клеткалар чыгарган нуклеазаларды токтото алат.

(Бирок, гуанидин изоцианаты лабораториялык изилдөөчүлөрдүн ден соолугу үчүн коркунучтуу.)

RNasin:

Кычкыл гликопротеин чычкан боорунан же адамдын бластодермасынан алынган.Rnasin RNase атаандаштыкка жөндөмсүз ингибитору болуп саналат, ал ар кандай RNase менен байланышып, аларды инактивациялай алат.

(Көбүрөөк маалымат: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hжогорку температура:

Жогорку температура да белок денатурациясынын кеңири таралган каражаты болуп саналат.

Диэтилпирокарбонат (DEPC):

DEPC күчтүү, бирок толук эмес RNase ингибитору болуп саналат, ал RNase активдүү тобундагы аминокислота имидазол шакеги менен биригип, протеиндерди денатурациялай алат.

Ванадил рибонуклеозиддик комплекс:

Ванадий оксидинин иондору жана нуклеозиддеринен түзүлгөн комплекс, ал RNase менен өтүүчү заттар түрүндө байланышат, ал RNase активдүүлүгүн дээрлик толугу менен токтото алат.

башка:

СДС, мочевина, диатомдуу топурак жана башкалар да RNazга белгилүү бир ингибитордук таасирге ээ.

Эксперттик сын-пикирлер

Ли Южие башкы техник

Тонгжи университетине караштуу Дунфан ооруканасынын Цзяочжоу ооруканасынын лаборатория бөлүмүнүн директору

Экзогендик RNase биодеградациясын болтурбоо үчүн, РНКны экстракциялоо процессинде беткаптарды, кол каптарды жана баш кийимдерди кийүү жана тез-тез алмаштыруу керек.Бардык айнек идиштерди кургаткыч меште 200°С 2 сааттан ашык бышыруу керек.Пластмасса сыяктуу бышыруу үчүн колдонулган материалдарды DEPC суусу менен тазалап, андан кийин дистилденген суу менен жууш керек.РНКны экстракциялоо, консервациялоо жана идентификациялоо үчүн колдонулган реагенттер же аппараттар РНКга арналып, РНКнын көз карандысыз иштөө аймагы түзүлүшү керек.

шилтемелер:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Түпкүлүктүү австралиялык балдарда төмөнкү курч респиратордук инфекциялар башталганга чейин мурун жуткундагы бактериялар жана вирустар [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Кытай профилактикалык Medicine Ассоциациясынын Ооруканадагы инфекцияларды көзөмөлдөө бөлүмү.Клиникалык микробдук үлгүлөрдү чогултуу жана текшерүү боюнча көрсөтмөлөр [J].Оорукана инфекциясынын кытай журналы, 2018 (20): 3192-3200.

[3] "Клиникалык тест он миң эмне үчүн молекулярдык биология тестинин көлөмү"