Мен ПЦР реакциясын жасоодо ар бир адам ар дайым тигил же бул көйгөйлөргө туш болот деп ишенем, бирок алардын көбүн эки негизги көйгөйгө бөлүүгө болот:

ген шаблонунун өтө аз күчөшү (күчөтүү);
Өтө көп максаттуу эмес генди күчөтүү.
Кошумчаларды колдонуу бул көйгөйлөрдү чечүүнүн жалпы стратегияларынын бири болуп саналат.Адатта, кошулмалардын ролу эки аспектиге ээ:
экинчи структурагендердин (экинчи структурасы);
Өзгөчө эмес праймерди азайтыңыз.
Бүгүн редактор сиздерди ПЦР реакцияларындагы кеңири таралган кошумчалар жана алардын функциялары менен кыскача тааныштырат.
Экинчи структураны азайтуучу кошумчалар
сульфоксид(DMSO)
ген үлгүлөрүжогорку GC мазмуну менен.Бирок, DMSO да абдан Taq полимераз активдүүлүгүн азайтат.Ошондуктан, ар бир адам шаблондун жеткиликтүүлүгүн жана полимеразанын активдүүлүгүн тең салмакташы керек.Редактор экспериментиңизге ылайыктуу концентрацияны табуу үчүн DSMOнун ар кандай концентрациясын, мисалы, 2%дан 10%ке чейин колдонуп көрүүнү сунуштайт.
Иондук эмес жуугучтар
0,1-1% Triton X-100, Tween 20 же NP-40 сыяктуу иондук эмес жуугучтар, адатта, ДНКнын экинчи структурасын азайтат.Бул шаблон генинин күчөшүн жогорулата турганына карабастан, спецификалык эмес күчөтүү кыйынчылыгын жаратат.Ошентип, бул кошумчалар калдыктары жок төмөн түшүмдүү ПЦР реакциялары үчүн жакшы иштейт, бирок салыштырмалуу таза эмес КЭР реакциялары үчүн анча жакшы эмес.Иондук эмес жуучу каражаттардын дагы бир артыкчылыгы - бул SDSтин булганышын азайтуу.Адатта, ДНКны экстракциялоо процессинде SDS ПТР баскычына жеткирилет, бул полимеразанын активдүүлүгүн бир топ тоскоол кылат.Ошондуктан реакцияга 0,5% Tween-20 же Tween-40 кошуу СДСтин терс таасирин нейтралдаштырат.
Betaine_
Бетаин экинчилик түзүлүштүн пайда болушун азайтуу аркылуу ДНКнын күчөтүлүшүн жакшыртат жана жалпысынан коммерциялык ПТР комплекттерине "сырдуу" кошумча болуп саналат.Эгер сиз бетаинди колдонууну кааласаңыз, анда бетаин же бетаин моно-гидрат (Бетаин же Бетаин моно-гидрат) коюу керек, бирок бетаин гидрохлориди (Бетаин HCl) эмес, 1-1,7M акыркы концентрациясына тууралаңыз.Бетаин ошондой эле өзгөчөлүктү жакшыртууга жардам берет, анткени ал ДНКнын эрүү/ДНК денатурациясынын базалык жуп курамынын көз карандылыгын жок кылат.
Өзгөчө эмес праймерди азайтуу үчүн кошумчалар
Формамид
Formamide көп колдонулган органикалык ПТР кошумча болуп саналат.Ал ДНКнын негизги оюгу жана кичине оюгу менен айкалышып, ошону менен башкы ДНКнын кош спиралынын туруктуулугун төмөндөтөт жана ДНКнын эрүү температурасын төмөндөтөт.ПТР эксперименттеринде колдонулган формамиддин концентрациясы адатта 1%-5% түзөт.
тетраметиламмоний хлориди( TMAC)
Тетраметиламмоний хлориди гибриддештирүүнүн өзгөчөлүгүн (гибриддештирүү өзгөчөлүгүн) жогорулатып, ДНКнын эрүү температурасын жогорулата алат.Ошентип, TMAC спецификалык эмес праймингди алып салышы жана ДНК менен РНКнын туура эмес байланышын азайтышы мүмкүн.Эгер колдонсоңузбузулган праймерлерПТР реакциясында көбүнчө 15-100мМ концентрациясында колдонулган TMAC кошууну унутпаңыз.
Башка жалпы кошумчалар
Жогоруда айтылган эки категориядагы кошулмалардан тышкары, ПЦР реакцияларында көптөгөн жалпы кошумчалар бар, бирок алар ар кандай функцияларды аткарса да, алар да абдан маанилүү.
Магний иону
Магний иону - полимеразанын ажырагыс кофактору (кофактор), башкача айтканда, магний иону болбосо, полимераза активдүү эмес.Бирок, өтө көп магний иондору да полимеразанын натыйжалуулугун таасир этиши мүмкүн.Ар бир ПТР реакциясында магний иондорунун концентрациясы ар кандай болот.Хелат агенттери (мисалы, EDTA же цитрат), dNTPs жана белоктордун концентрациясы магний иондорунун концентрациясына таасир этет.Ошентип, эгерде сизде ПТР экспериментиңизде көйгөйлөр бар болсо, анда ар кандай магний ионунун концентрациясын, мисалы, 1,0дон 4,0мМге чейин, ортосунда 0,5–1мМ интервал менен өзгөртүүгө аракет кылсаңыз болот.
Белгилей кетчү нерсе, бир нече тоңуу-эритүү циклдары магний хлоридинин эритмесинин концентрациясынын стратификациясына алып келиши мүмкүн.Андыктан ар бир колдонуудан мурун аны толук эритип, колдонуудан мурун жакшылап аралаштыруу керек.
Бодо малдын сывороткасынын альбумини(Бодо альбумин, BSA)
Молекулярдык химия эксперименттеринде бодо малдын сывороткасы альбумин абдан кеңири таралган кошумча болуп саналат, айрыкча чектөө ферменттерин сиңирүү жана ПТР эксперименттеринде.ПТР реакцияларында BSA фенолдук кошулмалар сыяктуу булгоочу заттарды азайтууга жардам берет.Жана ошондой эле пробирканын дубалына реактивдердин жабышуусун азайтышы мүмкүн деп айтылат.ПТР реакциясында, адатта, кошулган BSA концентрациясы 0,8 мг/мл жетиши мүмкүн.
 
Тектеш продуктылар:
PCR Hero(боёк менен)
PCR Hero