ПТР реакциясынын өзгөчөлүгү анын чоң күчтөндүрүү жөндөмдүүлүгү жана өтө жогорку сезгичтиги болуп саналат.ПТР натыйжалуулугун жана аныктоонун натыйжалуулугун жогорулатуу үчүн, биз ПТР күчөтүү дараметин жана аныктоо сезгичтигин жакшыртууга умтулабыз, бирок баш оору эксперимент процессинде.Жалган позитивдер көп кездешет жана үлгүнүн кайчылаш булгануусу же ПТР продуктунун булганышы өтө аз өлчөмдө экспериментте жалган позитивдерди пайда кылышы мүмкүн.
ПЦР продуктунун булганышынын беш түрү
ПЦР булганышынын көптөгөн себептери бар, аларды болжол менен төмөнкү категорияларга бөлүүгө болот:
Үлгүнүн булганышы негизинен үлгүнү чогултуу үчүн контейнердин булгануусунан келип чыгат, же үлгү жайгаштырылганда, ал бошоң жабылгандыктан контейнерден агып кетет, же үлгү контейнердин сыртына жабышып калат, бул кайчылаш булганууну пайда кылат;Контаминация үлгүлөрдүн ортосундагы булганууга алып келет;кээ бир микроб үлгүлөрү, өзгөчө вирустар, аэрозолдор менен жайылып же аэрозолдорду пайда кылып, өз ара булганууга алып келиши мүмкүн.
Негизги себеби, ПТР реагенттерин даярдоодо үлгү тапанчасы, идиш, кош дистилденген суу жана башка эритмелер ПТР нуклеиндик кислотасынын шаблону менен булганган.
Молекулярдык биология лабораторияларында жана клондолгон плазмидаларды позитивдүү башкаруу катары колдонгон кээ бир лабораторияларда клондолгон плазмиддердин булгануу маселеси да кеңири таралган.Анткени бирдик көлөмдө клондоштуруу плазмидинин мазмуну кыйла жогору жана тазалоо процессинде көбүрөөк шаймандар жана реактивдер керектелет жана тирүү клеткалардын күчтүү өсүү жана көбөйүү жөндөмдүүлүгүнөн тирүү клеткалардагы плазмиддин булганышы өтө ыктымал.
Күчөтүлгөн продукциянын булганышы ПЦР реакцияларында эң кеңири таралган булгануу көйгөйү болуп саналат.ПТР продуктунун копиясынын саны чоң болгондуктан (негизинен 1013 нуска/мл), бул ПТРди аныктоонун көчүрмө номеринин чегинен бир топ жогору, ПТР продуктунун булганышынын өтө аз көлөмү жалган позитивдерди пайда кылышы мүмкүн.
Аэрозолдук булгануу ПЦР продуктуларынын булганышынын эң ыктымалдуу түрү, ошондой эле аны байкабай коюу оңой.Ал суюктуктун бети менен абанын ортосундагы сүрүлүүдөн пайда болот.Адатта, аэрозоль менен булгануу капкак ачылганда, үлгү сорулганда, ал тургай реакция түтүгүн катуу чайкаганда да пайда болушу мүмкүн.Эсептөөлөргө ылайык, бир аэрозолдук бөлүкчө 48 000 нусканы камтышы мүмкүн, андыктан анын булганышы өзгөчө көңүл бурууга арзырлык маселе.
Атап айтканда, сыноо лабораториялары белгилүү бир генди текшерүү үчүн бир эле жуп праймерди колдонушат.Убакыттын өтүшү менен лабораториялык мейкиндикте ПЦР продуктунун булганышы көп болот.Мындай булгануу болгондон кийин аны кыска убакыттын ичинде жок кылуу кыйын.
Булгануунун алгачкы үч түрү үчүн эффективдүү каражаттарды колдонсок болот, бирок ПЦР продуктулары менен шартталган булганууну алдын алуу кыйын, айрыкча стандарттуу эмес ПТР лабораторияларын курууда.ПТР процессинде пипетка учу суюктукту соруп, үйлөгөндө жана ПТР түтүгүнүн капкагы ачылганда аэрозоль пайда болот.Аэрозоль ташыган ДНК молекулаларын (бир аэрозол он миңдеген ДНКны алып кете алат) абада калкып жүргөндүктөн жок кылуу кыйын.ПЦР эксперименттеринин кийинки айлампасы киргизилгенден кийин, жалган позитивдер сөзсүз түрдө пайда болот.
Төмөнкү сүрөттө көрүнүп тургандай, терс башкаруу да кызыкчылыктын тиешелүү тилкесин күчөттү:
ПЦРдин булганышы жана алдын алуу боюнча бул маселенин биринчи бөлүгү бул жерде киргизилген.Кийинки чыгарылыш сизге "ПЦР продуктунун булганышынын алдын алуу" экинчи бөлүгүн алып келет, андыктан кабардар болуңуз!
Посттун убактысы: 25-июль 2017-жыл
