Эксперимент кызматкерлеринин жүрүм-турумун стандартташтыруу үчүн ПТР эксперимент SOP түзүү.
Экспериментатор эксплуатациялоо процедураларын так сактайт жана адам факторлору менен шартталган ПЦР булганышын азайтат же булгануунун пайда болушуна жол бербейт.Мындан тышкары, экспериментатор тиешелүү кесиптик билимге жана көндүмгө ээ болушу керек, анын ичинде тиешелүү жабдууларды башкаруу, бүткүл иш процессин тактоо, булганууну тазалоо ыкмаларын жана лабораториялык сапатты көзөмөлдөө ыкмаларын өздөштүрүү, сыноонун натыйжаларын туура чечмелей билүү.
Стандарттуу ПЦР лабораториясын түзүү.
ПЦР лабораториясы негизинен төрт аймакка бөлүнөт, атап айтканда реагент даярдоо аймагы, үлгүлөрдү иштетүү аймагы, күчөтүү аймагы жана күчөтүү продуктусун талдоо аймагы.Алгачкы эки аймак - күчтөндүрүүгө чейинки аймактар, ал эми акыркы эки аймак - күчөтүлгөндөн кийинки аймактар.Алдын-ала күчөтүү зонасы менен күчөтүлгөндөн кийинки зонаны катуу бөлүп коюу керек.Эксперименттик материалдар, реагенттер, эсепке алуу кагазы, калемдер, тазалоочу материалдар ж.б. күчөгөнгө чейинки аймактан күчөтүлгөндөн кийинки аймакка, башкача айтканда, реагент даярдоо аймагынан → үлгүнү кайра иштетүү аймагынан → күчөтүү аймагынан → күчөтүү продуктусун талдоо аймагынан агып, артка агып кетпеши керек.Лабораториядагы аба агымы да артка эмес, күчөтүлгөнгө чейинки аймактан күчөтүлгөндөн кийинки аймакка агышы керек.Идеалдуу ПТР лабораториясынын дизайны төмөндө көрсөтүлгөн:
Сүрөт A: Буфердик бөлмөдө терс басым менен идеалдуу ПТР лабораториясын орнотуу режими
Сүрөт B: Буфердик бөлмөдө оң басым менен идеалдуу ПТР лабораториясын орнотуу режими
А жана В сүрөтүндө берилген ПТР лабораториясын орнотуу диаграммалары идеалдуу орнотуу режими болушу керек жана шарттары бар лаборатория долбоорлоо үчүн бул режимге кайрыла алат.Жөнөкөй лабораториялар үчүн ПТР күчөтүү аймагы менен продукцияны талдоо аймагын бөлүп алуу сунушталат, ал эми үлгү даярдоо зонасында жана ПТР күчөтүү зонасында капкактын ачылышын мүмкүн болушунча кыскартуу керек.Эсиңизде болсун: Продукцияны талдоо зонасында өнүмдөрдү жана эксперименталдык материалдарды үлгү даярдоо аймагына жана ПТР күчөтүү аймагына алып барууга катуу тыюу салынат.
Эгерде лаборатория ПТР аныктоону жана идентификациялоону гана жүргүзсө, кадимки ПТРдин ордуна флуоресценттик сандык ПТРди колдонуу сунушталат.
Флуоресценциянын сандык ПТР аныктоо жыйынтыктарын флуоресценция сигналдары менен чогултууга жана анализдөөгө болот, андыктан реакциядан кийин электрофорез үчүн капкакты ачуунун кажети жок, бул аэрозолдорду пайда кылуу үчүн реакция продуктыларынын агып чыгышынан келип чыккан ПТР продуктунун булганышын болтурбайт.Гель электрофорезин жүктөө баскычында капкак тешиктеринин санын көбөйтсөңүз, аэрозолдук булгануу пайда болушу мүмкүн.Сандык ПТРди колдонууну жайылтуу жана сапаттык ПТРди акырындык менен алмаштыруу сунушталат.
ПТР реакциясы үчүн UNG анти-ПЦР продуктунун булгануу системасы колдонулат.
Система dTTP ордуна dUTP колдонот.ПТР реакциясынан кийин бардык ПТР продуктулары (ДНК фрагменттери) dUTP менен кошулат;ПТР реакциясынын кийинки раундунда системага кошулган UNG ферменти 37°C температурада ПТРден 5 мүнөт мурун инкубацияланат, ал dUTP камтыган бардык ДНК фрагменттерин атайын деградациялай алат жана андан кийин ПТР реакциясын жүргүзөт.Бул ПЦР өнүмдөрүнөн келип чыккан аэрозолдук булганууну толугу менен жок кыла алат.Эффект төмөнкү сүрөттө көрсөтүлгөн:
Эскертүү: Түздөн-түз ПТР сериясы үчүн сиз Foregene компаниясынын анти-ПЦР продуктунун булгануу системасынын сериялык продуктуларын тандай аласыз.Сунуштоо
Кең масштабдуу генотиптүү тестирлөө жүргүзгөн лабораториялар үчүн, акылга сыярлык лабораторияларды куруудан тышкары, реагенттерди сыноо үчүн UNG анти-ПЦР продуктунун булгануу системасын колдонуу катуу сунушталат.
Эскертүү: Бул системаны колдонуу мурда пайда болгон ПТР продуктунун булганышын жок кыла албайт.Ошондуктан, UNG системасы тиешелүү тесттин башталышында колдонулушу керек, ал эми UNG системасы ПТР продуктуларынын булганышын алдын алуу үчүн, ПТР күчөтүү үчүн колдонулушу керек.
Ири масштабдуу тестирлөө жүргүзүүдө Foregene түз ПЦР-UNG системасын колдонуу сунушталат, мисалы:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Өсүмдүк үрөнүн түз ПТР комплекти-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Бул Foregene комплекттеринин сериясыПЦР аныктоону тез жана кеңири масштабда гана жүргүзбөстөн, ПЦР продуктунун булганышын эффективдүү алдын алуу жана контролдоо.
Посттун убактысы: 19-март-2021
