Канча билесиң

Жөнүндө Ннуклеин кислотасын алуу

Тазаланган нуклеин кислотасынын башталышы жана аягы

Башында баары кыйын, эң тазаланган нуклеин кислотасы

Молекулярдык эксперименттерди баштоо, кийинки эксперименттер үчүн

Ийгилик же ийгиликсиздик чечүүчү таасирин тийгизет.

Из/ультра-из ультрафиолет спектрофотометрди көптөгөн илимий изилдөөчүлөр жактырышат, анткени ал нуклеин кислотасынын концентрациясын жана протеин менен туз ионунун калдыктарын жөнөкөй, тез жана үнөмдүү аныктай алат.

Баарыбызга белгилүү болгондой, A260 - нуклеин кислотасынын ОД маанисин, A280 - белоктун концентрациясынын OD маанисин, A230 - туз ионунун концентрациясынын OD маанисин билдирет, ошондуктан A260 - нуклеин кислотасынын концентрациясын, A260/280 - белоктун калдыгын, A260/230 - туз ионунун калдыктарын билдирет, бирок бул чоң сандагы иондун калдыктары менен аныкталды, бирок бул чоң сандагы өлчөөлөрдүн натыйжалары менен аныкталды "шарттууДНК менен РНКнын тазалыгын түшүндүрө аларына ишенүүбелгилүү бир даражада.Бул нуклеин кислотасынын түшүмдүүлүгүн жана тазалыгын аныктоо үчүн жалгыз стандарт эмес, ал шилтеме катары гана колдонулат жана "алтын стандарт" эмес.

Thermo Fisher ND-2000 колдонмосу сыноо натыйжаларынын ишенимдүүлүгүнө басым жасайт

Себеби, микро/ультрамикро UV спектрофотометрди колдонуу менен алынган натыйжалар тараптан нуклеин кислотасынын түшүмдүүлүгүн жана тазалыгын гана чагылдырат жана көптөгөн таасир этүүчү факторлор бар (оптикалык жол, үлгү көлөмү, үлгү концентрациясы, рН мааниси, абсорбенцияны өлчөөгө таасир этүүчү башка иондор ж.б.) , өлчөнгөн OD мааниси сөзсүз түрдө так эмес.Ошол эле учурда, сиңирүү маанисин аныктоочу материалдын спецификасынын жоктугунан улам бир саптуу ДНК, эки саптуу ДНК, РНК, dNTPs жана кээ бир белоктор 260нм толкун узундугунда сиңүү чокуларына ээ жана жалгыз A260 тарабынан аныкталган концентрация сөзсүз түрдө чыныгы ДНК же РНК эмес.Концентрация, анын бүтүндүгү жана деградациясы соттолбойт.

Биздин тазаланган нуклеин кислотасынын сапатын кантип баалоого болот?Аныктоо үчүн микро/ультрамикро УК-спектрофотометрди колдонуудан тышкары, нуклеин кислотасынын тазалыгын жана бүтүндүгүн визуалдык түрдө көрсөтүү жана белгилүү бир деңгээлде концентрациясын көрсөтүү үчүн агароз гелинин электрофорези сыяктуу ыкмалар да талап кылынат.Ошентип, ар кандай ыкмалардын аныктоо натыйжаларынан алынган нуклеин кислотасынын түшүмү жана тазалыгы ишенимдүү.

Эксперименттик диаграмманы салыштыруу

H1299 клеткаларынын геномдук ДНКсы А компаниясынын ДНК экстракциялоо комплекттерин колдонуу менен алынган жана олуттуу ыпластыктын булганышы байкалган, натыйжада жогорку OD маанилери пайда болгон.

(OD өлчөө мааниси жана тиешелүү электроферограмма)

Баалоо индекси

Нуклеин кислотасынын түшүмдүүлүгү жана сапатын текшерүү үчүн "алтын стандарт" барбы?

Биз билгендей, жөнөкөй, тез жана арзан ыкма жок.Спектрофотометр болобу, гелдик электрофорез болобу, масс-спектрометр болобу, алардын баары эритмедеги нуклеин кислотасынын концентрациясын жана тазалыгын ар кандай аспектилерден чагылдырат жана аларды бири-бирине шилтеме кылуу менен баалоо керек.

Эң жакшы баа индекси ар дайым болоткийинки эксперименталдык колдонмо.Бул тескери транскрипциянын жана ПЦР күчөтүүнүн натыйжалуулугуна таасир этпейт.Ишенимдүү күчөтүү продуктуларын жана Ct маанилерин алуу жана секвенирлөө жолу менен толук ырааттуулукту алуу нуклеин кислотасын ийгиликтүү экстракциялоо болуп саналат.

Жыйынтыктап айтканда, бир гана катыш теориясынын көз карашы "жакшы экстракциянын параметрлери катары төмөнкү агымдагы жакшы эксперименталдык натыйжаларды колдонуу" көз карашы менен талашылышы керек!

Жогорку ДНК/РНК тазалыгын алуу үчүн сунушталган Foregene ДНК РНК экстракциялоо комплекттери:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/