mRNA вакцина деген эмне
mRNA вакцинасы РНКны организмдин клеткаларына протеин антигендерин экспрессиялоо жана өндүрүү үчүн in vitro тиешелүү модификациялардан кийин өткөрүп берет, ошону менен организмди антигенге каршы иммундук жооп жаратат, ошону менен организмдин иммундук мүмкүнчүлүктөрүн кеңейтет.[1,3].
1-сүрөт: mRNA вакцинасынын түз инъекциясынын эффектинин схемалык диаграммасы [2]
mRNA вакциналарынын классификациясы
mRNA вакциналар эки түргө бөлүнөт:кайталанбоочумРНК жанаөзүн-өзү күчөтүүmRNA: өзүн-өзү күчөтүүчү mRNA максаттуу антигенди гана коддобостон, ошондой эле клетка ичиндеги РНКны күчөтүүнү жана белоктун экспрессия механизмин камсыз кылган репликацияны коддойт.Репликацияланбаган мРНК вакциналары максаттуу антигендерди гана коддойт жана 5' жана 3' которулбаган аймактарды (UTR) камтыйт.Алар адаптациянын жана тубаса иммунитеттин комплекстүү стимулдаштыруусун камсыз кылат, тактап айтканда in situ антигенди экспрессиялоо жана коркунуч сигналын берүү жана төмөнкү колдонмолорго ээ.[2,3]
●Адаптациянын жана тубаса иммунитеттин комплекстүү стимуляциясын камсыздай алат, тактап айтканда in situ антигенди экспрессиялоо жана коркунуч сигналын берүү
●"салмактуу" иммундук жоопту, анын ичинде гуморалдык жана клеткалык эффекторлорду жана иммундук эстутумду жаратышы мүмкүн
●Вакцинаны түзүүнүн татаалдыгын жогорулатпастан, ар кандай антигендерди айкалыштыра алат
●Иммундук потенциалды тынымсыз жакшыртууга кайталап эмдөө аркылуу жетишүүгө болот, ал эми ташуучуга иммундук жооп жок же азыраак болот.
●Жылуулукка туруктуу mRNA вакциналары вакциналарды ташууну жана сактоону жөнөкөйлөтө алат
2-сүрөт: mRNA вакцинасынын схемалык диаграммасы жана анын антигенди экспрессиялоо механизми [4]
mRNA вакциналарынын өзгөчөлүктөрү
Салттуу вакциналар менен салыштырганда mRNA вакциналарынын өндүрүш процесстери жөнөкөй, өнүгүү ылдамдыгы тез, клетка культурасынын кереги жок жана баасы арзан.ДНК вакциналары менен салыштырганда, мРНК вакциналарынын ядрого кириши талап кылынбайт жана кабыл алуучу геномго интеграциялануу коркунучу жок.Жарым ажыроо мөөнөтү өзгөртүү жолу менен жөнгө салынышы мүмкүн.
Таблица 1: mRNA вакциналарынын артыкчылыктары жана кемчиликтери
|
| Артыкчылык | Кемчилик |
| мРНК вакцинасы | Ыкчам изилдөө жана иштеп чыгуу, вакцинаны өндүрүү 40 күндү гана талап кылат | Керексиз иммундук реакцияны жаратыңыз
|
| Физиологиялык шарттарда мРНКнын туруксуздугу, бузулушу оңой | Мүмкүн болгон терапиялык мутацияларды болтурбоо үчүн геномго интеграцияланбайт
| |
| Эч кандай ядролук локализация сигналынын, транскрипциянын кереги жок | Коопсуздук ядролук натыйжалуулугун текшерүү үчүн дагы эле
|
3-сүрөт: mRNA вакцинасын өндүрүү жана даярдоо процессинин схемасы [4]
Foregene Viral РНК изоляция комплекти
RT-qPCR Easy (Бир кадам)
mRNA вакциналарын даярдоонун жакшыртылган стратегиялары
mRNAнын өзүнүн начар туруктуулугунан, кыртыштардагы нуклеазалар тарабынан жеңил бузулушунан, клеткага кирүү эффективдүүлүгүнүн төмөндүгүнө жана которуунун төмөн эффективдүүлүгүнө байланыштуу бул кемчиликтер мРНК вакциналарын колдонууну чектейт.Котормо натыйжалуулугу да абдан маанилүү ролду ойнойт.Жеткирүү каражаттары вирустук векторлор жана вирустук эмес векторлор (анын ичинде липосомалар, липосомалар эмес, вирустар, нанобөлүкчөлөр ж.б.) болуп бөлүнөт.Ошондуктан, тиешелүү жакшыртуу чаралары керек.Төмөндө mRNA даярдоо үчүн фармакологиялык жакшыртуу стратегиясы болуп саналат[2]
1 Капчактын аналогдорун синтездеңиз же мРНКны турукташтыруу үчүн каптоочу ферменттерди колдонуңуз жана эукариоттук котормонун инициация фактору 4E (EIF4E) менен байланышып, белоктун которулушун жогорулатуу
2 mRNAны турукташтыруу жана протеин которууну жогорулатуу үчүн 5′-которулбаган аймактагы (UTR) жана 3′-UTR элементтерин тууралаңыз
3 Poly(A) куйругун кошуу мРНКны турукташтырууга жана протеин которууну көбөйтүүгө жардам берет
4 Өзгөртүлгөн нуклеозиддер тубаса иммундук активдештирүү азайтуу жана которууну жогорулатуу
5 RNase III менен дарылоо жана тез протеин суюк хроматографиясы (FPLC) тазалоо иммундук активдештирүүнү азайтат жана которууну жогорулатат
6 Которууну көбөйтүү үчүн ырааттуулуктарды же коддорду оптималдаштырыңыз
7 Котормо инициациясынын факторлорунун жана башка методдордун котормо жана иммуногендүүлүктү өзгөртүүнүн биргелешип берилиши
Сүрөт 4: In vitro транскрипциясы (IVT) mRNA өндүрүү жана чогултуу процесси [5]
Плазмиддик ДНКны масштабдуу даярдоо
Плазмиддик ДНКны тазалоо негизинен РНК, ачык чөйрө ДНК эндотоксин, кабыл алуучу протеин жана кабыл алуучу нуклеин кислотасы сыяктуу булгоочу заттарды жок кылат жана көбүнчө рекомбинантты плазмидди E. coliге айлантат.E. coli жогорку тыгыздыктагы ачытуудан, андан кийин катуу-суюктуктан бөлүнөт жана E. coli чогултулат.Андан кийин E. coli щелочтук лизиске, центрифугалык катуу суюктук бөлүүсүнө жана лизистен кийин микрофильтрацияга, такталгандан кийин ультра фильтрацияга жана концентрацияга, андан кийин хроматографиялык тазалоого дуушар болот.
Плазмиддик ДНКны тазалоо:
Foregene General Plasmid Mini Kit
【1】苗鹤凡, 郭勇, 江新香.мРНК疫苗研究进展及挑战[J].免疫学杂志, 2016(05):446-449.
【2】Парди Н, Хоган МЖ, Портер ФВ, ж.б.mRNA вакциналары - вакцинологиядагы жаңы доор [J].Nature Обзорлор Drug Discovery, 2018.
【3】Kramps T., Elbers K. (2017) Introduction to RNA Vaccines.In: Kramps T., Elbers K. (eds) RNA Vaccines.Methods in Molecular Biology, 1499-том. Humana Press, New York, NY.
【4】Maruggi G, Zhang C, Li J, ж.б.mRNA инфекциялык ооруларды көзөмөлдөө үчүн вакцинаны иштеп чыгуу үчүн трансформациялоочу технология катары[J].Молекулярдык терапия, 2019.
【5】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, mRNA вакцинасын тубаса/адаптивдүү иммундук жоопту тең салмактоо, молекулярдык медицинадагы тенденциялар, 26-том, 3,2020-ж., 311-323-беттер.
Посттун убактысы: 05-август-2021
