Жаныбарлардын жалпы РНК изоляциясынын комплекти Жаныбарлардын ткандары жана клеткалары үчүн жалпы РНКны экстракциялоо жана тазалоо комплекттери
Комплекттин сүрөттөлүшү:
Ар кандай жаныбарлардын кыртыштарынан жогорку тазалыктагы жана сапаттуу жалпы РНКны тез жана натыйжалуу чыгарып алыңыз.
РНКнын бузулушу жөнүндө тынчсыздануунун кереги жок.Бүт система RNase-Free болуп саналат
ДНКны тазалоо тилкесин колдонуу менен ДНКны эффективдүү алып салыңыз
DNase кошпостон ДНКны алып салуу
Жөнөкөй — бардык операциялар бөлмө температурасында аткарылат
Тез — операция 30 мүнөттүн ичинде бүтүшү мүмкүн
Коопсуз – эч кандай органикалык реагент колдонулбайт
Жогорку тазалык — OD260/280≈1,8-2,1
Комплекттердин сүрөттөмөлөрү
50 даярдык, 200 даярдык
Бул комплект колдонотайлануу тилкеси жана формулаБиздин компания тарабынан иштелип чыккан, ал ар кандай жаныбарлардын ткандарынан жогорку тазалыктагы жана сапаттуу жалпы РНКны жогорку эффективдүүлүк менен чыгара алат. Бул эффективдүү ДНК-тазалоо колонкасын камсыз кылат, ал геномдук ДНКны супернатанттан жана кыртыш лизатынан оңой бөлүп, адсорбциялай алат, жөнөкөй жана убакытты үнөмдөө;Бир гана РНК тилкеси РНКны эффективдүү байланыштыра алат жана бир эле учурда уникалдуу формула менен иштетилет. Көптөгөн үлгүлөр.
Бүт система RNase-Free, ошондуктан алынган РНК бузулбайт;Буфер RW1, Bufer RW2 буфер жуугуч системасы, ошондуктан алынган РНК белоктун, ДНКнын, иондун жана органикалык кошулмалардын булгануусунан таза болот.
Комплекттин компоненттери
| Жаныбарлардын жалпы РНК изоляциясынын комплекти | ||
| Комплекттин компоненттери | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 Т | 200 Т | |
| Буфер RL1* | 25мл | 100мл |
| RL2 буфери | 15мл | 60 мл |
| RW1 буфери* | 25мл | 100мл |
| RW2 буфери | 24мл | 96мл |
| RNase-Free ddH2O | 10мл | 40мл |
| РНК гана тилкеси | 50 | 200 |
| ДНК-тазалоо тилкеси | 50 | 200 |
| Instruction Manual | 1 даана | 1 даана |
Продукт маалыматы
| Формат | Айлантуу тилке | Тазалоо компоненти | Форгендик колонна, реагент |
| Флюс | 1-24 үлгүлөр | Даярдоо үчүн убакыт | ~30 мүн (24 үлгү) |
| Центрифуга | Үстөл центрифугасы | Пиролиздин бөлүнүшү | Центрифугалык бөлүү |
| Үлгү | Жаныбарлардын ткандары;клетка | Үлгүлөрдүн саны | кыртыш: 10-20 мг;Клетка:(1-5)×106 |
| Элюция көлөмү | 50-200 мкл | Максималдуу жүктөө көлөмү | 850 мкл |
Өзгөчөлүктөрү жана артыкчылыктары
■ РНК деградациясы жөнүндө тынчсыздануунун кереги жок;бүт система RNase-Free болуп саналат
■ ДНКны колдонуу менен ДНКны тазалоо тилкесин эффективдүү алып салыңыз
■ ДНКны кошпостон ДНКны алып салыңыз
■ Жөнөкөй - бардык операциялар бөлмө температурасында аткарылат
■ Fast -операцияны 30 мүнөттө бүтүрүүгө болот
■ Коопсуз-органикалык реагент талап кылынбайт
■ Жогорку тазалык -OD260/280≈1,8-2,1
Kit колдонмосу
Бул жаңы же тоңдурулган жаныбарлардын ткандарынан же маданияттуу клеткалардан жалпы РНКны алуу жана тазалоо үчүн ылайыктуу.
Продукт параметрлери
■ Төмөнкү колдонмолор: биринчи катардагы cDNA синтези, RT-PCR, молекулярдык клондоштуруу, Northern Blot ж.б.
■ Үлгүлөр: жаныбарлардын ткандары, өстүрүлгөн клеткалар
■ Дозасы: ткандар 10-20мг, клеткалар(2-5)×106
■ Тазалоо тилкесинин максималдуу ДНКны байланыштыруу жөндөмдүүлүгү: 80 мкг
■ Элюциянын көлөмү: 50-200 мкл
Диаграмма
Жаныбарлардын жалпы РНК изоляциясынын комплекти 20 мг дарыланган
Чычкандын жаңы үлгүлөрү, 5% тазаланган жалпы РНК 1% агарын алыңыз
Гликогель электрофорези
1: Көк боор 2: Бөйрөк
3: Боор 4: Жүрөк
Сактоо жана сактоо мөөнөтү
Комплект бөлмө температурасында (15–25 ℃) 24 айга же 2–8 ℃ узак мөөнөткө сакталат.RL1 буферин β-меркаптоэтанол (милдеттүү эмес) кошкондон кийин 1 ай бою 4 ℃ температурада сактоого болот.
Келтирилген макалалар
1.IF:18.808:Чжэн, К., Цинь, Ф., Луо, Р., ж.б.Борбордук Композиттик Дизайн оптималдаштыруу аркылуу боор базасын редакциялоо үчүн mRNA-жүктөлгөн липид сыяктуу нанобөлүкчөлөр.Adv.Функция.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF: 18.187:He X, Hong W, Yang J, ж.б.Терапиялык өзөктүү клеткаларды даярдоодо клеткалардын стихиялуу апоптозу фосфатидилсеринди бөлүп чыгаруу аркылуу иммуномодулятордук эффекттерди көрсөтөт.Signal Transduct Target Ther.2021 июль 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-Methylguanosine tRNA өзгөртүү oncogenic mRNA которууну күчөтөт жана intrahepatic cholangiocarcinoma прогрессия өбөлгө түзөт.Mol Cell.2021 июль 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF: 9.225: Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Mettl14-Mediated m6A модификациясы эндоплазмалык ретикулум гомеостазын сактоо менен боордун регенерациясын жеңилдетет.Cell Mol Gastroenterol Гепатол.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
үчүн РНК изоляция комплекттери башка үлгү булактарыжеткиликтүү:
Клетка, өсүмдүк, вирус, кан ж.
РНК алынбайт же РНКнын түшүмдүүлүгү төмөн
Көбүнчө калыбына келтирүү эффективдүүлүгүнө таасир этүүчү ар кандай факторлор бар, мисалы: кыртыш үлгүсүндөгү РНКнын мазмуну, иштөө ыкмасы, элюция көлөмү ж.б.
1. Иш учурунда муз ваннасы же криогендик (4 °C) центрифугалоо жүргүзүлдү.
Сунуш: Бөлмө температурасында (15-25°С) бүт процессти иштетиңиз, муз ваннасын жана төмөнкү температурада центрифугага салбаңыз.
2. Үлгүлөрдү туура эмес сактоо же ашыкча үлгү сактоо убактысы.
Сунуш: Үлгүлөрдү -80 °C температурада сактаңыз же суюк азотто тоңдуруңуз жана тоңдуруу-эрүү процессин кайталап колдонуудан качыңыз;РНКны алуу үчүн жаңы кыртыштарды же культураланган клеткаларды колдонууга аракет кылыңыз.
3. Үлгү лизисинин жетишсиздиги.
Сунуш: тканды гомогенизациялоодо, кыртыштын жетиштүү гомогендештирилгендигин жана ткандын клеткалары РНКнын чыгарылышын түшүндүрүү үчүн жетиштүү түрдө бөлүнгөндүгүн камсыз кылыңыз.
4. Элюент туура эмес кошулган.
Сунуш: RNase-Free ddH экенин ырастаңыз2О тазалоочу колонка мембранасынын ортосуна тамчылатып кошулат.
5. Абсолюттук этанолдун туура көлөмү Buffer RL2 же Buffer RW2 кошулган эмес.
Сунуш: нускамаларды аткарыңыз, RL2 буферине жана RW2 буферине абсолюттук этанолдун туура көлөмүн кошуп, комплектти колдонуудан мурун жакшылап аралаштырыңыз.
6. Ткань үлгүсүнүн дозасы ылайыктуу эмес.
Сунуш: 10-20 мг кыртыш же (1-5) × 10 колдонуңуз6500 мкл буфер RL1 үчүн клеткалар, анткени ткандарды ашыкча колдонуу РНКнын экстракциясын азайтууга алып келиши мүмкүн.
7. Туура эмес элюция көлөмү же толук эмес элюция.
Сунуш: Тазалоо колонкасынын элюциялык көлөмү 50-200 мкл;эгерде элюция эффектиси канааттандырарлык болбосо, алдын ала ысытылган RNase-Free ddH кошкондон кийин бөлмө температурасында жайгаштыруу убактысын узартуу сунушталат.2О, мисалы, 5-10 мүнөткө.
8.Тазалоо тилкесинде Buffer RW2 жуугандан кийин этанол калдыктары бар.
Сунуш: Буфер RW2 жуугандан кийин этанолдун калдыктары болсо, бош түтүктү 1 мүнөт центрифугалоо, бош түтүктү центрифугалоо операциясынын убактысын 2 мүнөткө чейин көбөйтүүгө болот, же калдык этанолду адекваттуу түрдө алып салуу үчүн тазалоо тилкесин бөлмө температурасында 5 мүнөткө коюуга болот.
Тазаланган РНК бузулат
Тазаланган РНКнын сапаты үлгүнүн сакталышы, RNase булганышы жана манипуляция сыяктуу факторлорго байланыштуу.
1. Ткандын үлгүлөрү өз убагында сакталбайт.
Сунуш: Эгерде кыртыштын үлгүлөрү же клеткалар чогултулгандан кийин өз убагында колдонулбаса, дароо -80 °C же суюк азотто криоконсервацияланыңыз.РНКны алуу үчүн, мүмкүн болушунча жаңы алынган кыртыш же клетка үлгүсүн колдонуңуз.
2. Кыртыштын үлгүлөрүн кайра-кайра тоңдуруу.
Сунуш: ткандардын үлгүлөрүн сактоодо сактоо үчүн аларды майда бөлүктөргө кесип, үлгүнүн кайра-кайра тоңуп эрүүсүнө жана РНКнын деградациясына жол бербөө үчүн аларды колдонууда бөлүктөрүнүн бирин алып салуу жакшы.
3. Операция учурунда RNase киргизилет же бир жолу колдонулуучу кол кап, беткап ж.б. кийбейт.
Сунуш: РНКны экстракциялоо эксперименттери эң жакшы өзүнчө РНК манипуляциялык бөлмөлөрдө аткарылат жана үстөл эксперимент алдында тазаланат.
Эксперимент учурунда RNase киргизүү менен шартталган РНК деградациясын азайтуу үчүн бир жолу колдонулуучу кол каптарды жана маскаларды кийиңиз.
4. Реагенттер колдонуу учурунда RNase менен булганган.
Сунуш: Тиешелүү эксперименттер үчүн жаны жаныбарлардын жалпы РНК изоляциялык комплекти менен алмаштырыңыз.
5. РНКны манипуляциялоодо колдонулган центрифуга түтүктөрү, учтары ж.б. RNase менен булганган.
Сунуш: РНКны экстракциялоодо колдонулган центрифуга түтүктөрүнүн, учтардын, пипеткалардын жана башкалардын бардыгы RNaseсиз экенин ырастаңыз.
Тазаланган алынган РНК төмөнкү агымдагы эксперименттерге таасир этет
Тазалоо тилкесинде тазаланган РНК, эгерде туз иондору, белоктун мазмуну өтө чоң болсо, төмөнкү агымдагы экспериментке таасир этет, мисалы: тескери транскрипция, Northern Blot et al.
1. Элюцияланган РНКда туз ионунун калдыктары бар.
Сунуш: RW2 буферине этанолдун туура көлөмү кошулганын ырастаңыз жана операция үчүн көрсөтүлгөн центрифугалык ылдамдыкта 2 тазалоо тилкесин жууп көрүңүз;кандайдыр бир туз ионунун калдыктары бар болсо, тазалоо тилкесин RW2 буферине бөлмө температурасында 5 мүнөткө калтырыңыз жана туздун булганышын максималдуу түрдө жок кылуу үчүн центрифугалоо жүргүзүңүз.
2. Эллюзияланган РНКдагы этанолдун калдыгы.
Сунуш: RW2 буферин жуугандан кийин, бош түтүктү центрифугалоо операциясын операция үчүн көрсөтүлгөн центрифугалоо ылдамдыгы менен аткарууну ырастаңыз, эгерде этанолдун калдыктары дагы эле болсо, бош түтүктү центрифугалоо операциясынын убактысын 2 мүнөткө чейин көбөйтүңүз же центрифугалоочу бош түтүктү максималдуу кайра алуу үчүн 5 мүнөткө бөлмө температурасында калтырыңыз.
