Animal Tissue Direct PCR kit-UNG (Үлгүлөрдү алуу куралдары жок) Протоколу
Комплекттин сүрөттөлүшү:
ДНКны өзүнчө экстракциялоосуз, тез жана жогорку сезгичтик менен ПЦР күчөтүү үчүн шаблон катары жаныбарлардын тканынын лизатын түз колдонуңуз.Жалган позитивдерди жок кылуу үчүн UNG булганууга каршы системасы кошулду.
◮Убакытты жана кымбат баалуу ДНКны тазалоо талап кылынбайт.
◮Үлгү суроо-талап аз, жөн гана бир үрөндү алып.
◮Майдалоо жана майдалоо сыяктуу атайын дарылоо талап кылынбайт жана операция жөнөкөй.
◮Оптималдаштырылган ПТР системасы ПТРге жогорку өзгөчөлүккө жана ПТР реакциясынын ингибиторлоруна күчтүүрөөк чыдамкайлыкка ээ болууга мүмкүндүк берет.
Сүрөттөмөлөр
Бул комплект ПЦР реакциялары үчүн жаныбарлардын ткандарынын үлгүлөрүнөн геномдук ДНКны тез чыгаруу үчүн уникалдуу лизис буфердик системасын колдонот, ошондуктан ал кеңири масштабдуу генетикалык тестирлөө үчүн өзгөчө ылайыктуу.
Лизис буферинен геномдук ДНКны чыгаруу процесси 65°С температурада 10-30 мүнөттүн ичинде аяктайт.Протеин жана РНКны жок кылуу сыяктуу башка процесстер талап кылынбайт жана бошотулган изи ДНК ПТР реакциясы үчүн шаблон катары колдонулушу мүмкүн.
2 × PCR EasyTMMix (UNG) 2×PCR Easy негизинде dTTP ордуна dUTP колдонотTMАралаштырыңыз жана ошол эле учурда dUTP камтыган шаблонду начарлатуучу UNG ферментин (Урацил-Н-гликозилаза) кошот.ПТР реакциясына чейин UNG ферменти урацил камтыган ПТР продуктусун бузуу үчүн колдонулат.UNG ферменти урацилди камтыбаган шаблонго эч кандай таасир этпейт, ошону менен күчөтүүнүн өзгөчөлүгүн жана тактыгын камсыз кылат жана кеңири масштабдуу генетикалык тестирлөө учурунда ПЦР продуктуларынын булгануу мүмкүнчүлүгүн алдын алат.
D-Taq ДНК полимераза - бул Foregene тарабынан түз ПТР реакциялары үчүн атайын иштелип чыккан ДНК полимераза.D-Taq ДНК полимеразасы ПТР реакциясынын ар кандай ингибиторлоруна күчтүү толеранттуулукка ээ жана ар кандай татаал реакция системаларында ДНКнын издүү көлөмүн эффективдүү күчөтө алат жана күчөтүү ылдамдыгы 2Кб/мин жетиши мүмкүн, бул түздөн-түз ПТР реакциясы үчүн өзгөчө ылайыктуу.
Комплекттин компоненттери
| I бөлүм | буфер AL |
| Foregene Protease | |
| 6× ДНК жүктөө буфери | |
| II бөлүм | 2 × PCR EasyTMМикс(UNG) |
Өзгөчөлүктөрү жана артыкчылыктары
■Убакытты жана кымбат ДНКны тазалоонун кереги жок
■ Үлгү суроо-талап аз, 5мг мал кыртышын сынаса болот.
■ Майдалоо жана майдалоо сыяктуу атайын дарылоо талап кылынбайт жана операция жөнөкөй.
■ Оптималдаштырылган ПТР системасы ПТРдин жогорку спецификасын жана ПТР реакциясынын ингибиторлоруна толеранттуулукту арттырат.
■ Булганууга каршы ПЦР системасы 2×PCR EasyTMMix (UNG) ПЦР продуктуларынан келип чыккан булганууну эффективдүү жок кылат жана күчөтүүнүн өзгөчөлүгүн жана тактыгын камсыздайт.
Комплекттин параметрлери
Колдонмо: жаныбарлардын ар кандай кыртыштары.
Үлгү лизистен чыккан ДНК: ПТР үлгүсү катары гана колдонулат.
Комплект төмөнкү максаттарда колдонулушу мүмкүн: трансгенозду идентификациялоо, жаныбарларды генотиптөө ж.б.
Иш агымы
Сактоо жана сактоо мөөнөтү
Бул комплекттин I бөлүгү 2-8де сакталышы керек℃.
Reagent Buffer AL кургак шарттарда 12 ай бою сакталышы мүмкүн;ал 2-8 сактоого болот℃узак сактоо үчүн.
Foregene Protease реагентинин уникалдуу формуласы бар.Анын активдүүлүгүн жана туруктуулугун камсыз кылуу үчүн аны 4тө сактаңыз℃12 айга.
Реагент 6×ДНК жүктөө буферин 4тө сактаса болот℃же -20℃узак убакыт бою.
Бул комплекттин II бөлүгү -20 сакталышы керек℃.
Реагент 2×PCR EasyTMMix(UNG), эгерде ал көп колдонулса, анда 4тө да сактаса болот℃кыска мөөнөттүү сактоо үчүн (10 күндүн ичинде колдонуу).
