Cell Direct RT qPCR комплекти—SYBR GREEN I
Комплекттин сүрөттөлүшү:
◮Жөнөкөй жана натыйжалуу: Cell Direct RT технологиясы менен РНК үлгүлөрүн 7 мүнөттүн ичинде алууга болот.
◮Үлгү суроо-талап аз, 10 клетканы сынаса болот.
◮Жогорку өткөрүү жөндөмдүүлүгү: 384, 96, 24, 12, 6 көзөнөктүү плиталарда өстүрүлгөн клеткаларда РНКны тез аныктай алат.
◮ДНК өчүргүч бошотулган геномдорду тез эле жок кыла алат, кийинки эксперименталдык натыйжаларга таасирин бир топ азайтат.
◮Оптимизацияланган RT жана qPCR системасы эки баскычтуу RT-PCR тескери транскрипциясын эффективдүүрөөк жана ПТРди спецификалык жана RT-qPCR реакциясынын ингибиторлоруна туруктуураак кылат.
Сүрөттөмөлөр
Бул комплект уникалдуу лизис буфердик системасын колдонот, ал РНКны RT-qPCR реакциялары үчүн культураланган клетка үлгүлөрүнөн тез чыгара алат, ошону менен көп убакытты талап кылган жана РНКны тазалоо процессин жокко чыгарат.РНК үлгүсүн 7 мүнөттө эле алууга болот.5×Түздөн-түз RT Mix жана 2×Комплект тарабынан берилген түз qPCR Mix-SYBR реагенттери реалдуу убакытта сандык ПТР натыйжаларын тез жана эффективдүү ала алышат.
5×Түздөн-түз RT Mix жана 2×Түз qPCR Mix-SYBR күчтүү ингибиторго толеранттуулукка ээ жана үлгүлөрдүн лизаты түздөн-түз RT-qPCR үчүн шаблон катары колдонулушу мүмкүн.Бул комплект уникалдуу РНКнын жогорку жакындыктагы Foregene тескери транскриптазасын жана Hot D-Taq ДНК полимеразасын, dNTPs, MgCl камтыйт.2, реакция буфери, ПТР оптимизатору жана стабилизатор.
Техникалык шарттар
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Комплекттин компоненттери
| I бөлүк | буфер CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Буфер ST | |
| II бөлүм | ДНК өчүргүч |
| 5× Түздөн-түз RT Mix | |
| 2× Түз qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX шилтеме боёгу | |
| RNase-Free ddH2O | |
| Instructions | |
Өзгөчөлүктөрү жана артыкчылыктары
■Жөнөкөй жана эффективдүү: Cell Direct RT технологиясы менен РНК үлгүлөрүн 7 мүнөттүн ичинде алууга болот.
■ Үлгү суроо-талап аз, 10 клетканы сынаса болот.
■ Жогорку өткөрүү жөндөмдүүлүгү: ал 384, 96, 24, 12, 6 көзөнөктүү плиталарда өстүрүлгөн клеткаларда РНКны тез аныктай алат.
■ ДНК өчүргүч бошотулган геномдорду тез эле жок кыла алат, андан кийинки эксперименталдык натыйжаларга таасирин бир топ азайтат.
■ Оптималдаштырылган RT жана qPCR системасы эки баскычтуу RT-PCR тескери транскрипциясын натыйжалуураак жана ПТРди спецификалык жана RT-qPCR реакциясынын ингибиторлоруна туруктуураак кылат.
Kit колдонмосу
Колдонуу чөйрөсү: маданияттуу клеткалар.
- Үлгү лизиси аркылуу чыгарылган РНК: бул комплекттин RT-qPCR үлгүсүнө гана тиешелүү.
- Комплект төмөнкү максаттарда колдонулушу мүмкүн: ген экспрессиясын талдоо, siRNA аркылуу генди өчүрүү эффектин текшерүү, дары скрининги ж.б.
Диаграмма
Сактоо жана сактоо мөөнөтү
Бул комплекттин I бөлүгү 4℃ температурада сакталышы керек;II бөлүгү -20 ℃ сакталышы керек.
Foregene Protease Plus II 4тө сакталышы керек℃, -20℃ тоңдурбаңыз.
Реагент 2×Түз qPCR Mix-SYBR -20 сакталышы керек℃караңгыда;көп колдонулса, ал 4 да сакталышы мүмкүн℃ кыска мөөнөттүү сактоо үчүн (10 күндүн ичинде колдонуу).
Real Time ПТР праймерди долбоорлоо принциптери
Алдыга Primer жана Reverse Primer
Real Time ПТР үчүн праймердин дизайны абдан маанилүү.Примерлер ПТР күчөтүүнүн өзгөчөлүгүнө жана эффективдүүлүгүнө байланыштуу жана төмөнкү принциптерге таянуу менен иштелип чыгышы мүмкүн:
Primer узундугу: 18-30bp.
GC мазмуну: 40-60%.
Tm мааниси: Primer дизайн программасы, мисалы, Primer 5, праймердин Tm маанисин бере алат.Жогорку жана ылдыйкы праймерлердин Tm маанилери мүмкүн болушунча жакын болушу керек.Tm эсептөө формуласын да колдонсо болот: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).ПТР жүргүзүүдө 5 °C праймердин Tm маанисинен төмөн температура көбүнчө күйдүрүү температурасы катары тандалат (тамырлоо температурасынын тиешелүү жогорулашы ПТР реакциясынын өзгөчөлүгүн жогорулатат).
Primer жана ПТР продуктулары:
Дизайн праймер ПТР күчөтүү продукт узундугу артык 100-150bp болуп саналат.
Калыптын экинчилик структуралык аймагындагы дизайн праймерлеринен мүмкүн болушунча качуу керек.
Агымдагы жана ылдыйкы праймерлердин 3′ учтарынын ортосунда 2 же андан көп кошумча негиздер пайда болбошу керек.
Primer 3′ терминалдык базасы 3 кошумча катары менен G же C болушу мүмкүн эмес.
Праймерлердин өздөрү кошумча түзүмгө ээ боло албайт, антпесе ПЦРдин күчөшүнө таасир этүүчү чачтуу түзүлүш пайда болот.
ATCG праймер тизмегинде мүмкүн болушунча бирдей бөлүштүрүлүшү керек, ал эми 3′ терминалдык базаны Т катары качуу керек.
1-тиркеме:Cell Direct RT-qPCR Kit компоненттеринин кошумча пакети
1.Cell Lysis Solution
|
| |||
| Комплекттин компоненттери (24-кудук лизис системасы / скважина) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| PartИ | буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| PartII | ДНК өчүргүч | 400 мкл | 1 мл × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Комплекттин компоненттери (20 мкл реакция системасы) | DRT-01011-B1 |
| 200 Т | |
| 5× Түздөн-түз RT Mix | 800 мкл |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 мл × 2 |
|
| ||
| Комплекттин компоненттери (20 мкл реакция системасы) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2× Түз qPCR Mix-SYBR | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 50× ROX шилтеме боёгу | 40 мкл | 200 мкл |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 мл | 10 мл |
