Cell Direct RT qPCR комплекти — Taqman түз клетка лизис клеткасы даяр бир кадамдуу qRT-PCR топтомдорунун зонду
Сүрөттөмөлөр
Бул продукт уникалдуу лизис буфердик тутумун колдонот, бул RT-qPCR реакциялары үчүн маданияттуу клетка үлгүлөрүнөн РНКны тез чыгаруу үчүн, көп убакытты талап кылган жана эмгекти талап кылган РНКны тазалоо процессин жокко чыгарат жана 5× Түз RT Mix, 2× Түз qPCR Mix-Taqman менен талап кылынган РНК үлгүсүн алуу үчүн болгону 7 мүнөт гана убакытты талап кылат.
5× Түздөн-түз RT Микс жана 2× Түз qPCR Mix-Taqman күчтүү ингибиторго толеранттуулукка ээ жана үлгү катары өлчөнө турган үлгүдөгү лизаттын жардамы менен эффективдүү тескери жана конкреттүү күчөтүүнү аткара алат.Реагенттин курамында Foregene Reverse Transscriptase, Hot D-Taq ДНК Полимераза, dNTPs, MgCl бар.2, Реакция буфери, ПТР оптимизатору жана стабилизатор, лизис буфери менен үлгүлөрдү тез жана оңой аныктоо үчүн колдонулушу мүмкүн жана жогорку сезгичтик, өзгөчөлүк жана туруктуулук мүнөздөмөлөрүнө ээ.
Техникалык шарттар
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Комплекттин компоненттери
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Комплекттин компоненттери 20μl qPCR реакция системасы | DRT-01021 | DRT-01022 | Эскертүү | |
| 200 Т | 1000 Т | |||
|
Part I | буфер CL | 4 мл | 20 мл | Клетка лизиси |
| Foregene Protease Plus II | 80 мкл | 400 мкл | ||
| Буфер ST | 400 мкл | 1 мл × 2 | ||
|
Part II | ДНК өчүргүч | 80 мкл | 400 мкл | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 мкл | 800 мкл | RT | |
| 2× Түз qPCR Микс-Такман * | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 | qPCR | |
| 20×ROX шилтеме боёгу | 40 мкл | 200 мкл | ||
| RNase-Free ddH2O | 1,7 мл | 10 мл | ||
| Instruction Manual | 1 даана | 1 даана | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman өзүнчө сатып алса болот
Өзгөчөлүктөрү жана артыкчылыктары
■Жөнөкөй жана эффективдүү: Cell Direct RT технологиясы менен РНК үлгүлөрүн 7 мүнөттүн ичинде алууга болот.
■ Үлгү суроо-талап аз, 10 клетканы сынаса болот.
■ Жогорку өткөрүү жөндөмдүүлүгү: ал 384, 96, 24, 12, 6 көзөнөктүү плиталарда өстүрүлгөн клеткаларда РНКны тез аныктай алат.
■ ДНК өчүргүч бошотулган геномдорду тез эле жок кыла алат, андан кийинки эксперименттик натыйжаларга таасирин бир топ азайтат.
■ Оптималдаштырылган RT жана qPCR системасы эки баскычтуу RT-PCR тескери транскрипциясын натыйжалуураак жана ПТРди спецификалык жана RT-qPCR реакциясынын ингибиторлоруна туруктуураак кылат.
Kit колдонмосу
Колдонуу чөйрөсү: маданияттуу клеткалар.
- Үлгү лизиси аркылуу чыгарылган РНК: бул комплекттин RT-qPCR үлгүсүнө гана тиешелүү.
- Комплект төмөнкү максаттарда колдонулушу мүмкүн: ген экспрессиясын талдоо, siRNA аркылуу генди өчүрүү эффектин текшерүү, дары скрининги ж.б.
Сактоо жана сактоо мөөнөтү
Бул комплекттин I бөлүгү 4тө сакталышы керек℃;II бөлүгү -20 ℃ сакталышы керек.
Foregene Protease Plus II 4тө сакталышы керек℃, -20℃ тоңдурбаңыз.
Реагент 2×Түз qPCR Mix-Taqman -20 сакталышы керек℃караңгыда;көп колдонулса, ал 4 да сакталышы мүмкүн℃ кыска мөөнөттүү сактоо үчүн (10 күндүн ичинде колдонуу).
Real Time ПТР праймерди долбоорлоо принциптери
Алдыга Primer жана Reverse Primer
Real Time ПТР үчүн праймердин дизайны абдан маанилүү.Праймерлер ПТР күчөтүүнүн өзгөчөлүгүнө жана эффективдүүлүгүнө байланыштуу жана төмөнкү принциптерге таянуу менен иштелип чыгышы мүмкүн:
- Primer узундугу: 18-30bp.
- GC мазмуну: 40-60%.
- Tm мааниси: Primer дизайн программасы, мисалы, Primer 5, праймердин Tm маанисин бере алат.Жогорку жана төмөнкү агымдык праймерлердин Tm маанилери мүмкүн болушунча жакын болушу керек.Tm эсептөө формуласын да колдонсо болот: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).ПТР жүргүзүүдө, жалпысынан 5 °C праймердин Tm маанисинен төмөн температура күйдүрүү температурасы катары тандалат (тамырлоо температурасынын тиешелүү жогорулашы ПТР реакциясынын өзгөчөлүгүн жогорулатат).
- Primer жана ПТР продуктулары:
- Дизайн праймер ПТР күчөтүү продукт узундугу артык 100-150bp болуп саналат.
- Калыптын экинчи структуралык аймагындагы дизайн праймерлеринен мүмкүн болушунча качуу керек.
- Агымдагы жана ылдыйкы праймерлердин 3′ учтарынын ортосунда 2 же андан көп кошумча негиздер пайда болбошу керек.
- Primer 3′ терминалдык базасы 3 кошумча катары менен G же C болушу мүмкүн эмес.
- Праймерлердин өздөрү кошумча түзүмгө ээ боло албайт, антпесе ПТРдин күчөшүнө таасир этүүчү чачтын түзүлүшү пайда болот.
- ATCG праймер ырааттуулугунда мүмкүн болушунча бирдей бөлүштүрүлүшү керек, ал эми 3′ терминалдык база Т катары качуу керек.
Тиркеме1:Cell DirectRT-qPCR Компонент комплектt кошумча пакети
1.Cell Lysis Solution
| Cell Lysis Solution | |||
| Комплекттин компоненттери (24-кудук лизис системасы / скважина) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| PartИ | буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| PartII | ДНК өчүргүч | 400 мкл | 1 мл × 2 |
| RT Mix | |
| Комплекттин компоненттери (20 мкл реакция системасы) | DRT-01011-B1 |
| 200 Т | |
| 5× Түздөн-түз RT Mix | 800 мкл |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 мл × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Комплекттин компоненттери (20 мкл реакция системасы) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2× Түздөн-түз qPCR Mix-Taqman | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20× ROX шилтеме боёгу | 40 мкл | 200 мкл |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 мл | 10 мл |
Instruction Manuals:
