Клетканын жалпы РНК изоляциясынын комплекти Клеткадан жалпы РНК изоляциясынын тазалоочу топтомдору
Комплекттин сүрөттөлүшү:
Жогорку тазаланган жана сапаттуу жалпы РНКны ар кандай культураланган клеткалардан 11 мүнөттө алууга болот.
RNase-Free
Бөлмө температурасында иштейт (15-25 ℃)
ДНК-тазалоо тилкеси менен
РНКнын жогорку түшүмдүүлүгү
Тез: 11 мүнөттө экстракцияны бүтүрүңүз
Коопсуздук: эч кандай органикалык химиялык
Description
Бул комплект 96, 24, 12 жана 6 көзөнөктүү пластинкаларда өстүрүлгөн клеткалардан жогорку тазалыктагы жана сапаттуу жалпы РНКны эффективдүү бөлүп ала турган Foregene тарабынан иштелип чыккан спиндик мамычаны жана формуланы колдонот.
Комплект эффективдүү ДНК-тазалоо колоннасын камсыздайт, ал супернатантты жана клетка лизатын оңой ажыратып, геномдук ДНКны байлап, жок кыла алат.Операция жөнөкөй жана убакытты үнөмдөйт.
Tал РНК гана колоннасы уникалдуу формула менен РНКны эффективдүү байланыштыра алат.Көп сандагы үлгүлөрдү бир эле учурда иштетүүгө болот.
Комплекттин компоненттери
| Комплекттин курамы | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 Т | 200 Т | |
| Буфер cRL1* | 25 мл | 100 мл |
| Буфер cRL2 | 15 мл | 60 мл |
| RW1 буфери* | 25 мл | 100 мл |
| RW2 буфери | 24 мл | 96 мл |
| RNase-Free ddH2O | 10 мл | 40 мл |
| РНК гана тилкеси | 50 | 200 |
| ДНК-тазалоо тилкеси | 50 | 200 |
| Instruction | 1 | 1 |
*Операция учурунда кол кап кийиңиз жана коргоочу чараларды көрүңүз, анткени Bufer cRL1 жана Bufer RW1 дүүлүктүрүүчү хаотроптук туздарды камтыйт.
Өзгөчөлүктөрү жана артыкчылыктары
■ Бүт процесс бөлмө температурасында (15-25℃), муз ваннасы жана төмөнкү температурадагы центрифугасыз иштетилет.
■ Бүт комплект RNase-Free, РНК деградациясы жөнүндө тынчсыздануунун кереги жок.
■ ДНК-тазалоо тилкеси ДНКны атайын байланыштырат, андыктан комплект кошумча DNase кошпостон геномдук ДНКнын булганышын жок кыла алат.
■ РНКнын жогорку түшүмдүүлүгү: РНК гана мамычасы жана уникалдуу формула РНКны эффективдүү тазалай алат.
■ Ыкчам ылдамдык: иштетүү оңой жана 11 мүнөттө бүткөрүлөт.
■ Коопсуздук: эч кандай органикалык реагент талап кылынбайт.
■ Жогорку сапат: Тазаланган РНК жогорку тазалыкка ээ, белок жана башка аралашмалар жок жана ар кандай кийинки эксперименттерге жооп бере алат.
Kit колдонмосу
Ал 96, 24, 12 жана 6-кудуктуу пластинкаларда өстүрүлгөн клеткалардан жалпы РНКны алуу жана тазалоо үчүн ылайыктуу.
Иш агымы
Диаграмма
Клетканын жалпы РНК изоляциясынын комплектинин агароздук гелдин батарейка диаграммасы жогорудагы ар кандай клеткалардын санын, 20 мкл көлөмдөгү элюцияны, 2 мкл тазаланган жалпы РНКны 1% кабыл алды.
Сактоо жана сактоо мөөнөтү
Комплект бөлмө температурасында (15–25 ℃) 12 айга же 2–8 ℃ узак мөөнөткө (24 ай) сакталат.
CRL1 буферин 2-гидрокси-1-этанетиолду (милдеттүү эмес) кошкондон кийин 1 ай бою 4 ℃ температурада сактоого болот.
РНК алынбайт же РНКнын түшүмдүүлүгү төмөн
Көбүнчө калыбына келтирүү эффективдүүлүгүнө таасир этүүчү ар кандай факторлор бар, мисалы: кыртыш үлгүсүндөгү РНКнын мазмуну, иштөө ыкмасы, элюция көлөмү ж.б.
1. Иш учурунда муз ваннасы же криогендик (4 °C) центрифугалоо жүргүзүлдү.
Сунуш: Бөлмө температурасында (15-25°С) бүт процессти иштетиңиз, муз ваннасын жана төмөнкү температурада центрифугага салбаңыз.
2. Үлгүлөрдү туура эмес сактоо же ашыкча үлгү сактоо убактысы.
Сунуш: Үлгүлөрдү -80 °C температурада сактаңыз же суюк азотто тоңдуруңуз жана тоңдуруу-эрүү процессин кайталап колдонуудан качыңыз;РНКны алуу үчүн жаңы кыртыштарды же культураланган клеткаларды колдонууга аракет кылыңыз.
3. Үлгү лизисинин жетишсиздиги.
Сунуш: тканды гомогенизациялоодо, кыртыштын жетиштүү гомогендештирилгендигин жана ткандын клеткалары РНКнын чыгарылышын түшүндүрүү үчүн жетиштүү түрдө бөлүнгөндүгүн камсыз кылыңыз.
4. Элюент туура эмес кошулган.
Сунуш: RNase-Free ddH экенин ырастаңыз2О тазалоочу колонка мембранасынын ортосуна тамчылатып кошулат.
5. Абсолюттук этанолдун туура көлөмү Buffer RL2 же Buffer RW2 кошулган эмес.
Сунуш: нускамаларды аткарыңыз, RL2 буферине жана RW2 буферине абсолюттук этанолдун туура көлөмүн кошуп, комплектти колдонуудан мурун жакшылап аралаштырыңыз.
6. Ткань үлгүсүнүн дозасы ылайыктуу эмес.
Сунуш: 10-20 мг кыртыш же (1-5) × 10 колдонуңуз6500 мкл буфер RL1 үчүн клеткалар, анткени ткандарды ашыкча колдонуу РНКнын экстракциясын азайтууга алып келиши мүмкүн.
7. Туура эмес элюция көлөмү же толук эмес элюция.
Сунуш: Тазалоо колонкасынын элюциялык көлөмү 50-200 мкл;эгерде элюция эффектиси канааттандырарлык болбосо, алдын ала ысытылган RNase-Free ddH кошкондон кийин бөлмө температурасында жайгаштыруу убактысын узартуу сунушталат.2О, мисалы, 5-10 мүнөткө.
8.Тазалоо тилкесинде Buffer RW2 жуугандан кийин этанол калдыктары бар.
Сунуш: Буфер RW2 жуугандан кийин этанолдун калдыктары болсо, бош түтүктү 1 мүнөт центрифугалоо, бош түтүктү центрифугалоо операциясынын убактысын 2 мүнөткө чейин көбөйтүүгө болот, же калдык этанолду адекваттуу түрдө алып салуу үчүн тазалоо тилкесин бөлмө температурасында 5 мүнөткө коюуга болот.
Тазаланган РНК бузулат
Тазаланган РНКнын сапаты үлгүнүн сакталышы, RNase булганышы жана манипуляция сыяктуу факторлорго байланыштуу.
1. Ткандын үлгүлөрү өз убагында сакталбайт.
Сунуш: Эгерде кыртыштын үлгүлөрү же клеткалар чогултулгандан кийин өз убагында колдонулбаса, дароо -80 °C же суюк азотто криоконсервацияланыңыз.РНКны алуу үчүн, мүмкүн болушунча жаңы алынган кыртыш же клетка үлгүсүн колдонуңуз.
2. Кыртыштын үлгүлөрүн кайра-кайра тоңдуруу.
Сунуш: ткандардын үлгүлөрүн сактоодо сактоо үчүн аларды майда бөлүктөргө кесип, үлгүнүн кайра-кайра тоңуп эрүүсүнө жана РНКнын деградациясына жол бербөө үчүн аларды колдонууда бөлүктөрүнүн бирин алып салуу жакшы.
3. Операция учурунда RNase киргизилет же бир жолу колдонулуучу кол кап, беткап ж.б. кийбейт.
Сунуш: РНКны экстракциялоо эксперименттери эң жакшы өзүнчө РНК манипуляциялык бөлмөлөрдө аткарылат жана үстөл эксперимент алдында тазаланат.
Эксперимент учурунда RNase киргизүү менен шартталган РНК деградациясын азайтуу үчүн бир жолу колдонулуучу кол каптарды жана маскаларды кийиңиз.
4. Реагенттер колдонуу учурунда RNase менен булганган.
Сунуш: Тиешелүү эксперименттер үчүн жаны жаныбарлардын жалпы РНК изоляциялык комплекти менен алмаштырыңыз.
5. РНКны манипуляциялоодо колдонулган центрифуга түтүктөрү, учтары ж.б. RNase менен булганган.
Сунуш: РНКны экстракциялоодо колдонулган центрифуга түтүктөрүнүн, учтардын, пипеткалардын жана башкалардын бардыгы RNaseсиз экенин ырастаңыз.
Тазаланган алынган РНК төмөнкү агымдагы эксперименттерге таасир этет
Тазалоо тилкесинде тазаланган РНК, эгерде туз иондору, белоктун мазмуну өтө чоң болсо, төмөнкү агымдагы экспериментке таасир этет, мисалы: тескери транскрипция, Northern Blot et al.
1. Элюцияланган РНКда туз ионунун калдыктары бар.
Сунуш: RW2 буферине этанолдун туура көлөмү кошулганын ырастаңыз жана операция үчүн көрсөтүлгөн центрифугалык ылдамдыкта 2 тазалоо тилкесин жууп көрүңүз;кандайдыр бир туз ионунун калдыктары бар болсо, тазалоо тилкесин RW2 буферине бөлмө температурасында 5 мүнөткө калтырыңыз жана туздун булганышын максималдуу түрдө жок кылуу үчүн центрифугалоо жүргүзүңүз.
2. Эллюзияланган РНКдагы этанолдун калдыгы.
Сунуш: RW2 буферин жуугандан кийин бош түтүктү центрифугалоо операциясын операция үчүн көрсөтүлгөн центрифугалоо ылдамдыгы менен аткарууну ырастаңыз, эгер этанолдун калдыктары дагы болсо бош түтүктү центрифугалоо операциясынын убактысын 2 мүнөткө чейин көбөйтүңүз же бөлмө температурасында 5 м калтырыңыз.
