(96 кудук) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR комплекти – Taqman
Сүрөттөмөлөр
The(96-кудук) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR комплекти–Такманкамсыз кылатуникалдуу лизис буфер системасыto РНКны тез бөлүп чыгаратмаданияттуу клеткаданRT-qPCR реакциялары үчүн үлгүлөр, көп убакытты жана эмгекти талап кылууну жокко чыгаратРНКны тазалоо процесси жана керектүү РНК шаблонун алуу үчүн болгону 7 мүнөт талап кылынат.The5× Түздөн-түз RT Mixжана2× Түз qPCR Mix-SYBRкутуда берилген тез жана болотнатыйжалуу реалдуу убакыт сандык алууПЦР натыйжалары.
5× Түз RT Микс жана 2× Түз qPCR Mix-Taqman күчтүү ингибиторлорго толеранттуулукка ээ жана эффективдүү тескери транскрипция жана спецификалык күчөтүү үчүн үлгү катары сыналуучу үлгүнүн лизатын колдоно алат.Реагентте РНКга жогорку жакындыгы бар Foregene уникалдуу тескери транскриптазасы, ошондой эле Hot D-Taq ДНК полимеразасы, dNTPs, MgCl камтылган.2 , реакция буфери, ПЦР оптимизатору жана стабилизатору жана үлгүнү тез, оңой жана так аныктоо үчүн лизис буфери менен бирге колдонулушу мүмкүн жана ал жогорку сезгичтик, күчтүү өзгөчөлүк жана жакшы туруктуулуктун өзгөчөлүктөрүнө ээ.
Комплект 96 жакшы өстүрүлгөн клеткалардын микросистемалык лизисине багытталган жана жакшы бирдейликке жана ырааттуулукка ээ;комплекттин компоненттери 96 лизис реакциясын, 96 тескери транскрипция реакциясын жана 96 × 2 qPCR реакциясын камсыздайт, алар бир жолку колдонуу үчүн 96 уячалуу пластинкага жооп бере алат, реагенттерди кайра-кайра ачуудан, тоңдуруудан жана эритүүдөн келип чыккан булгануудан жана реагенттин иштешинин начарлашынан сактайт.
Комплекттин компоненттери
| Комплекттин курамы ( 50 μL лизис системасы/20 мклRT реакция системасы /20μL qPCR реакция системасы) | DRT-03021 | Эскертүү | |
| 96T | |||
| PartI | буферCL | 5 мл | КлеткаЛизис |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| буферST | 500 μL | ||
| Part II | ДНКөчүргүч | 100 μL | |
| 5× Түздөн-түз RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Түз qPCR аралашмасы-Такман | 1 мL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX шилтеме боёгу | 400μL | ||
| RNase- бекерddH2 O | 1,7 мл |
| |
| Mжылдык | 1 даана | 1 порция | |
*: Лизис реагент ДНК өчүргүч комплекттин II бөлүгүнө киргизилген;Cell Lysis, RT жана qPCR компоненттерин өзүнчө сатып алса болот.
Өзгөчөлүктөрү жана артыкчылыктары
■Жөнөкөй жана эффективдүү: Cell Direct RT технологиясы менен РНК үлгүлөрүн 7 мүнөттүн ичинде алууга болот.
■ Үлгү суроо-талап аз, 10 клетканы сынаса болот.
■ Жогорку өткөрүү жөндөмдүүлүгү: ал 384, 96, 24, 12, 6 көзөнөктүү плиталарда өстүрүлгөн клеткаларда РНКны тез аныктай алат.
■ ДНК өчүргүч бошотулган геномдорду тез эле жок кыла алат, андан кийинки эксперименттик натыйжаларга таасирин бир топ азайтат.
■ Оптималдаштырылган RT жана qPCR системасы эки баскычтуу RT-PCR тескери транскрипциясын натыйжалуураак жана ПТРди спецификалык жана RT-qPCR реакциясынын ингибиторлоруна туруктуураак кылат.
Kit колдонмосу
Колдонуу чөйрөсү: маданияттуу клеткалар.
- Үлгү лизиси аркылуу чыгарылган РНК: бул комплекттин RT-qPCR үлгүсүнө гана тиешелүү.
- Комплект төмөнкү максаттарда колдонулушу мүмкүн: ген экспрессиясын талдоо, siRNA аркылуу генди өчүрүү эффектин текшерүү, дары скрининги ж.б.
Сактоо жана сактоо мөөнөтү
Бул комплекттин I бөлүгү 4тө сакталышы керек℃;II бөлүгү -20 ℃ сакталышы керек.
Foregene Protease Plus II 4тө сакталышы керек℃, -20℃ тоңдурбаңыз.
Реагент 2×Түз qPCR Mix-Taqman -20 сакталышы керек℃караңгыда;көп колдонулса, ал 4 да сакталышы мүмкүн℃ кыска мөөнөттүү сактоо үчүн (10 күндүн ичинде колдонуу).
Real Time ПТР праймерди долбоорлоо принциптери
Алдыга Primer жана Reverse Primer
Real Time ПТР үчүн праймердин дизайны абдан маанилүү.Праймерлер ПТР күчөтүүнүн өзгөчөлүгүнө жана эффективдүүлүгүнө байланыштуу жана төмөнкү принциптерге таянуу менен иштелип чыгышы мүмкүн:
- Primer узундугу: 18-30bp.
- GC мазмуну: 40-60%.
- Tm мааниси: Primer дизайн программасы, мисалы, Primer 5, праймердин Tm маанисин бере алат.Жогорку жана төмөнкү агымдык праймерлердин Tm маанилери мүмкүн болушунча жакын болушу керек.Tm эсептөө формуласын да колдонсо болот: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).ПТР жүргүзүүдө, жалпысынан 5 °C праймердин Tm маанисинен төмөн температура күйдүрүү температурасы катары тандалат (тамырлоо температурасынын тиешелүү жогорулашы ПТР реакциясынын өзгөчөлүгүн жогорулатат).
- Primer жана ПТР продуктулары:
- Дизайн праймер ПТР күчөтүү продукт узундугу артык 100-150bp болуп саналат.
- Калыптын экинчи структуралык аймагындагы дизайн праймерлеринен мүмкүн болушунча качуу керек.
- Агымдагы жана ылдыйкы праймерлердин 3′ учтарынын ортосунда 2 же андан көп кошумча негиздер пайда болбошу керек.
- Primer 3′ терминалдык базасы 3 кошумча катары менен G же C болушу мүмкүн эмес.
- Праймерлердин өздөрү кошумча түзүмгө ээ боло албайт, антпесе ПТРдин күчөшүнө таасир этүүчү чачтын түзүлүшү пайда болот.
- ATCG праймер ырааттуулугунда мүмкүн болушунча бирдей бөлүштүрүлүшү керек, ал эми 3′ терминалдык база Т катары качуу керек.
Тиркеме1:Cell DirectRT-qPCR Компонент комплектt кошумча пакети
1.Cell Lysis Solution
| Cell Lysis Solution | |||
| Комплекттин компоненттери (24-кудук лизис системасы / скважина) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| PartИ | буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| PartII | ДНК өчүргүч | 400 мкл | 1 мл × 2 |
| RT Mix | |
| Комплекттин компоненттери (20 мкл реакция системасы) | DRT-01011-B1 |
| 200 Т | |
| 5× Түздөн-түз RT Mix | 800 мкл |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 мл × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Комплекттин компоненттери (20 мкл реакция системасы) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2× Түздөн-түз qPCR Mix-Taqman | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20× ROX шилтеме боёгу | 40 мкл | 200 мкл |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 мл | 10 мл |
Instruction Manuals:
