Escherichia Coli O157: H7 Нуклеиндик кислоталарды аныктоо комплекти (PCR Fluorescent Probe Method/Lyofilization)
Комплекттин сүрөттөлүшү:
Cat.No.FP103
Бул тамак-аш, тоют, суунун үлгүлөрү жана айлана-чөйрөнүн үлгүлөрү E. coli O157: H7 тез аныктоо жана скрининг үчүн колдонулат.
Сүрөттөмөлөр
үчүн колдонулаттамак-аш, тоют, суунун үлгүлөрү жана айлана-чөйрөнүн үлгүлөрү E. coli O157:H7 тез аныктоо жана скрининг.
[Сыноо принциби]
Флуоресценттик ПТР технологиясынын принцибине ылайык, спецификалык праймерлер жана Такман зонддору Escherichia coli O157: H7 спецификалык гени үчүн иштелип чыккан жана флуоресценттүү ПТР аспабы менен аныкталган, ошентип Escherichia coli O157: H7 ДНКны сапаттуу аныктоо.
Комплекттин мазмуну
Эскертүү: ROX каналынын текшерүүсү камтылган эмес.
| Cкаршылаштары | Спецификация | Qбирдик |
| Буфер А | Түтүк | 1 |
| Буфер Б | Түтүк | 1 |
| Позитивдүү башкаруу | Түтүк | 1 |
| Терс көзөмөл | Түтүк | 1 |
Күтүлгөн колдонуу
үчүн колдонулат тамак-аш, тоют, суунун үлгүлөрү жана айлана-чөйрөнүн үлгүлөрү E. coli O157:H7 тез аныктоо жана скрининг.
Сактоо шарттары жана жарактуулук мөөнөтү
Караңгы жерде -20℃ температурада сактаңыз жана кайра-кайра тоңдуруудан жана эрүүдөн сактаңыз.
Жарактуулук мөөнөтү - 12ай, ал эми өндүрүш датасы сырткы таңгагында көрсөтүлгөн.
Инструменттер жана сарпталуучу материалдар
Флуоресценттик сандык ПТР инструменти, пипетка тапанчасы жана дал келген учтар, вортекс, мини центрифуга.
Колдонуу
1. Үлгү иштетүү
1.1 Үлгү түрү: Бул комплект тамак-аш, тоют, суунун үлгүлөрү жана Escherichia coli O157:H7 менен булганган деп шектелген башка үлгүлөр үчүн ылайыктуу.Терең иштетилген эт азыктары, суусундуктар жана пигменттери бар башка заттар үчүн флуоресценттик сигнал чогултууга таасирин тийгизбөө үчүн аларды жууш керек.
1.2 Үлгүлөрдү кайра иштетүү: Үлгүлөрдү даярдоо, байытуу маданияты жана Escherichia coli O157: H7 изоляциясы үчүн "GB 4789.10-2016 Тамак-аш коопсуздугу боюнча улуттук стандарт тамак-аштын микробиологиялык экспертизасы Escherichia coli O157: H7 Test" караңыз.
- Nнуклеин кислотасын алуу
1,5 мл центрифуга түтүкчөсүнө 20 мл байытуучу эритмени алып, 200 мкл микроб лизатын (кошумча комплект талап кылынат) кошуп, 30 секундга айлантып, кыска убакытка центрифугалап, четке коюңуз.
Эскертүү: Лизаттан нуклеин кислотасын алуу 10 мүнөттүн ичинде бүтүшү керек жана аны көпкө сактоого болбойт.
3. Нуклеиндик кислоталарды күчөтүү
3.1 Флуоресценттик сандык ПТР аспапты колдонуу үчүн күйгүзүңүз.
Комплекттен буфер А жана Б буфери, аларды жакшылап эритип, кыска убакытка центрифугалаңыз.Ар бир ПТР реакция түтүкчөсүнө 18 мкл А буферин жана 2 мкл В буферин кошуңуз.Андан кийин ар бир терс контролдун, экстракцияланган нуклеин кислотасынын жана оң контролдун ар бирине 5 млден ПТР реакциясынын түтүктөрүнө кошуп, түтүкчөлөрдү жаап, кыска убакытка центрифугалаңыз.
3.3 ПЦР реакция түтүгүн флуоресценттик ПТР машинасына өткөрүп, күчөтүү эксперименттерин аткаруу үчүн төмөнкү процедураларды колдонуңуз: реакция системасы үчүн 25 мл тандаңыз, ар бир цикл үчүн 60°C флуоресценттик сигналдарды чогултуңуз жана аныктоо каналы үчүн FAM тандаңыз.
| Кадам | Программа | Циклдердин саны |
| 1 | 37℃ 5 мүн | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3мин | 1 |
| 3 | 95°C 15с | 4 0 |
| 60℃ 30с (флуоресценцияны чогултуу) |
Проблемаларды талдоо үчүн колдонмолор
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Эч бир РНК алынбайт же нуклеин кислотасынын түшүмү төмөн
Калыбына келтирүү эффективдүүлүгүнө таасир этүүчү көптөгөн факторлор бар, мисалы: үлгү РНКсынын мазмуну, иштөө ыкмасы, элюция көлөмү ж.б..
Жалпы себептерди талдоо:
1.Ice ваннасы же төмөнкү температурадагы (4°C) операция учурунда центрифугалоо.
Сунуш: бөлмө температурасында (15-25 ° C) иштөө, эч качан муз ваннасы жана төмөнкү температурадагы центрифуга.
2. Туура эмес үлгү сактоо же өтө көпкө үлгү сактоо.
Сунуш: Үлгүлөрдү -80 ° C температурада сактаңыз же суюк азотто тоңдуруңуз жана тоңдуруу-эритүү процессин кайталап колдонуудан качыңыз;РНК алуу үчүн жаңы чогултулган үлгүлөрдү колдонууга аракет кыл.
3. Үлгү лизиси жетишсиз
Сунуш: Үлгү жана жумушчу эритме (сызыктуу акриламид) кылдат аралаштырылып, бөлмө температурасында (15-25 ° C) 10 мүнөт инкубацияланганын текшериңиз.
4.Элюент туура эмес кошулган
Сунуш: RNase-Free ddH2O тазалоо тилкесинин мембранасынын ортосуна кошулганын текшериңиз
5.ViRW2 буфериндеги суусуз этанолдун туура эмес көлөмү
Сунуш: Инструкцияларды аткарыңыз, viRW2 буферине суусуз этанолдун туура көлөмүн кошуп, комплектти колдонуудан мурун аларды жакшылап аралаштырыңыз.
6.Improper үлгү колдонуу.
Сунуш: Bufer viRL 500μl үчүн 200μл үлгү.Ашыкча үлгү көлөмү кыскарган РНК казып алуу ылдамдыгын алып келет.
7.Туура эмес элюция көлөмү же толук эмес элюция.
Сунуш: тазалоо колоннасынын элюент көлөмү 30-50μl болуп саналат;эгерде элюция эффектиси канааттандырарлык болбосо, алдын ала ысытылган RNase-Free ddH кошуу сунушталат.2О жана бөлмө температурасында жайгаштыруу убактысын узартуу, мисалы, 5-10мин
8.Тазалоо тилкесинде Buffer viRW2 менен жуугандан кийин этанолдун калдыктары бар.
Сунуш: Эгерде viRW2 буферинде чайкоодон кийин этанол дагы эле кала берсе жана бош түтүктү 2 мүнөткө центрифугалагандан кийин, калган этанолду толук алып салуу үчүн тазалоо колонкасын бош түтүк центрифугалоодон кийин бөлмө температурасында 5 мүнөткө калтырса болот.
Тазаланган РНК молекулаларынын бузулушу
Тазаланган РНКнын сапаты үлгү сактоо, RNase булганышы жана иштөө сыяктуу факторлорго байланыштуу.
Жалпы себептерди талдоо:
1.Жыйналган үлгүлөр убагында сакталган эмес.
Сунуш: Эгерде үлгү чогултулгандан кийин өз убагында колдонулбаса, аны дароо -80 ℃ же суюк азотто сактаңыз.РНК молекулаларын алуу үчүн, мүмкүн болушунча жаңы чогултулган үлгүлөрдү колдонууга аракет кылыңыз.
2.Collected үлгүлөр кайра-кайра тоңдуруу жана эрүү болгон.
Сунуш: Үлгүлөрдү чогултуу жана сактоо учурунда кайра-кайра тоңдуруудан жана эритүүдөн (бир жолудан ашык эмес) качыңыз, антпесе нуклеин кислотасынын түшүмдүүлүгү төмөндөйт.
3.RNase операциялык бөлмөдө киргизилген же бир жолу колдонулуучу кол каптар, маскалар ж.б. кийилген эмес.
Сунуш: РНК молекулаларын экстракциялоо эксперименти өзүнчө РНК операциялык бөлмөсүндө эң жакшы аткарылат жана эксперименталдык стол эксперимент алдында тазаланат.Эксперимент учурунда RNase киргизүү менен шартталган РНК деградациясын болтурбоо үчүн бир жолу колдонулуучу кол каптарды жана маскаларды кийиңиз.
4.Колдонуу учурунда реагент RNase менен булганган.
Сунуш: Тиешелүү эксперименттер үчүн жаңы вирустук РНК изоляция комплектине алмаштырыңыз.
5. Центрифуга түтүкчөлөрүнүн, пипеткалардын учтарынын, ж.б. RNase менен булганышы. Сунуш: Центрифуга түтүктөрүнүн, пипеткалардын учтары жана пипеткалардын бардыгы RNase-эркин экендигин текшериңиз.
Тазаланган РНК молекулалары төмөнкү агымдагы эксперименттерге таасирин тийгизди
Тазалоо тилкесинде тазаланган РНК молекулалары туз иондору же белоктор өтө көп болсо, төмөнкү агымдагы эксперименттерге таасир этет, мисалы: тескери транскрипция, Түндүк Блот ж.б.
1.Элюцияланган РНК молекулаларында калган туз иондору бар.
Сунуш: viRW2 буферине суусуз этанолдун туура көлөмү кошулганын текшериңиз жана тазалоо тилкесин иштетүү нускамасындагы туура центрифугалоо ылдамдыгына ылайык эки жолу жууп алыңыз; Эгерде дагы эле туз иондору калган болсо, сиз viRW2 буферин тазалоо колонкасына кошуп, бөлмө температурасында 5 мүнөткө калтырсаңыз болот.Андан кийин туз иондорунун булганышын эң чоң деңгээлде жок кылуу үчүн центрифугалоо жүргүзүңүз
2.Элюцияланган РНК молекулаларында этанол калган
Сунуш: тазалоо тилкелери viRW2 буфери менен чайкалганын ырастагандан кийин, колдонуу нускамасындагы центрифугалык ылдамдыкка ылайык бош түтүктү центрифугалоону жүргүзүңүз.Эгерде этанол дагы эле калган болсо, анда калган этанолду эң чоң өлчөмдө алып салуу үчүн бош түтүк центрифугалоодон кийин бөлмө температурасында 5 мүнөткө калтырууга болот.
Instruction Manuals:
Вирустук РНК изоляциясынын комплектинин нускамалары
