Түз RT-qPCR комплект III
Комплекттин сүрөттөлүшү:
◮Түз RT-qPCR комплекти Foregene тарабынан иштелип чыккан Foreasy Reverse Transscriptase жана Foreasy HS Taq ДНК Полимеразасын колдонуп, уникалдуу реакция буфери менен бул комплектти күчтүү каршылык жана шайкештик менен түзөт жана ал Foregene Lysis системасын калып катары түздөн-түз сынай алат.Бул комплект COVID-19 нуклеин кислотасын аныктоочу комплект жана башка патогендик бактериялардын нуклеин кислотасын аныктоочу комплектти иштеп чыгуу үчүн колдонулушу мүмкүн.
Description
Түз RT-qPCR топтому өзүнчө пакеттелген RT-qPCR буферин (Foreasy HS Taq ДНК полимераза аралаштырылган) жана жогорку эффективдүү камсыз кылат.Болжолдуу тескери транскриптаза (MMLV),аны жөнөкөй текшерүүнүн алкагында арткы комплекттерди жана системаны тууралоону түзүүгө ыңгайлуу кылуу.
Түз RT-qPCR комплекти Foregene тарабынан иштелип чыккан Foreasy Reverse Transscriptase жана Foreasy HS Taq ДНК Полимеразасын колдонуп, уникалдуу реакция буфери менен бул комплектти күчтүү каршылык жана шайкештик менен түзөт жана ал Foregene Lysis системасын калып катары түздөн-түз сынай алат.Бул комплект COVID-19 нуклеин кислотасын аныктоочу комплект жана башка патогендик бактериялардын нуклеин кислотасын аныктоочу комплектти иштеп чыгуу үчүн колдонулушу мүмкүн.
Бул комплект түздөн-түз оңой жана тез колдонуу менен IVD продуктунун компоненти боло алат.Аны кайра иштеп чыкпастан, оңой текшерүү гана керек.
Техникалык шарттар
500T, 50,000T
Комплекттин компоненттери
| Комплекттин мазмуну (20 мкл реакция системасы) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 Т | 50 000 Т | |
| Алдын ала Ркайра транскриптаза(200 U/μL) | 50 мкл×1 | 1 мл×5 |
| 2× Түз qPCRMix-Taqman | 1 мл ×5 | 500 мл×1 |
| Instruction | 1 | 1 |
Иштөө кадамдары
Ж: Шаблон менен реагентти даярдаңыз
1. Даярдалган РНК шаблонун (РНК үлгүсүн бөлүп алуу жана тазалоо үчүн Foregene Total RNA Isolation Kit сериясынын комплектин колдонуу сунушталат) же үлгүдөгү крекинг продуктусун (Foregene Lysis системасын колдонуу сунушталат), спецификалык праймерлерди (10 мкм) жана башка тиешелүү керектелүүчү материалдарды, аспапты даярдаңыз.
2. 2× Түз RT-qPCR буферин, RNase-Free ddH2O жана 20× ROX маалымдама боёгун (эгер ал керек болсо) муз салынган кутуга салып, аларды табигый түрдө эритип, акырын аралаштырыңыз.
B: RT-qPCR системасын даярдоо
Реакция системасынын реакция буферинин жарым көлөмүн алыңыз (мисалы, системанын көлөмү 20 мкл болсо, анда ал 10 мкл 2× Түз RT-qPCR буферин алуу керек). үчүнэнзимдин тиешелүү көлөмү, биз муну сунуштайбызM-MLV: 10-30 U/20 мкл реакция системасы,ТакДНК полимераза:1-2 U/20 мкл реакция системасыбул биздин сунуш, сиз аны текшерип, тууралашыңыз керек), РНК шаблонун, конкреттүү праймерлерди жана зонддорду кошуп, RNase-Free ddH кошуңуз2O 20 мкл.RT-qPCR реакция системасынын спецификалык даярдалышын төмөнкү таблицадан көрсөтсө болот.
1-таблица: RT-qPCR системасын даярдоо
| Компонент | Көлөм | Акыркы концентрация |
| 2× Түз RT-qPCR буфери | 10 мкл | 1× |
| Болжолдуу тескери транскриптаза (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq ДНК Полимераза | 1-2 U | |
| Алдыга праймер (10 мкм) | 0,8 мкл | 50-900нМ |
| Тескери праймер (10 мкм) | 0,8 мкл | 50-900нМ |
| Зонд (4 мкм) | 1 мкл | 200нМ |
| Үлгү (РНК же Лизат) | X мкл | |
| 20× ROX шилтеме боёгу | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) мкл | |
| Жалпы көлөмү | 20 мкл |
Эскертүү: Forward Primer жана Reverse Primer максаттуу гендин спецификалык праймерлери.qPCR системасы практикалык эксперименталдык жана ПТР моделдерине ылайык жөнгө салынышы мүмкүн.Көпчүлүк праймерлердин акыркы концентрациясы үчүн 400нМди сунуштайбыз.Даярдалган концентрацияга жана сунушталган акыркы концентрацияга ылайык конкреттүү праймерлердин жана зонддордун көлөмүн тууралаңыз.
1*: Ар кандай сандык ПТР аспаптарына ылайык ROX Reference Dyeнин ылайыктуу акыркы концентрациясын тандаңыз.Жалпы сандык ПТР аспаптарынын оптималдуу ROX Reference Dye концентрациясы төмөнкү таблицада көрсөтүлгөн:
| Сандык ПЦР аспаптары | ROX Reference Dye акыркы концентрациясы |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One,жана башкалар | 1× (мисалы, 20 мкл реакция системасына 1μl 20×ROX Reference Dye кошуңуз) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P жана Mx4000 ж.б. | 0,5× (мисалы, 20 мкл реакция системасына 0,5μl 20×ROX шилтеме боёгун кошуңуз) |
| Roche ПТР аспабы, Bio-Rad ПТР аспабы, Эппендорф сандык ПТР аспабы ж.б. | ROX шилтеме боёгу жок |
Сактоо жана сактоо мөөнөтү
Комплект -20 ± 5 ℃ температурада сакталышы керек.Аны дароо -20℃ термостатикалык муздаткычта сактоо керек.Жарактуулук мөөнөтү, эгерде ал ылайыктуу абалда сакталса, 2 жыл.
